Vaigu uztriepes/FTA kartes DNS izolācijas komplekts Genomiskā DNS ekstrakcijas vai attīrīšanas komplekts no vaiga uztriepēm
Komplekta apraksts:
Ātri attīriet augstas kvalitātes genoma DNS no vaigu uztriepes/FTA kartes paraugiem.
◮Nav RNāzes piesārņojuma:Komplektā iekļautā tikai DNS kolonna ļauj noņemt RNS no genoma DNS, eksperimenta laikā nepievienojot RNāzi, novēršot laboratorijas piesārņošanu ar eksogēnu RNāzi.
◮Ātrs ātrums:Foregene Protease ir augstāka aktivitāte nekā līdzīgām proteāzēm, un tā ātri sagremo audu paraugus;darbība ir vienkārša, un genoma DNS ekstrakcijas darbību var pabeigt 20-80 minūšu laikā.
◮Ērti:Centrifugēšanu veic istabas temperatūrā, un nav nepieciešama DNS centrifugēšana 4°C zemā temperatūrā vai etanola izgulsnēšana.
◮Drošība:Organisko reaģentu ekstrakcija nav nepieciešama.
◮Augstas kvalitātes:Ekstrahētajā genoma DNS ir lieli fragmenti, nav RNS, nav RNāzes un ārkārtīgi zems jonu saturs, kas var atbilst dažādu eksperimentu prasībām.
◮Mikroeluēšanas sistēma:Tas var palielināt genoma DNS koncentrāciju, kas ir ērti pakārtotai noteikšanai vai eksperimentēšanai.
Apraksts
Šis komplekts nodrošina efektīvu un ātru metodi augstas koncentrācijas genoma DNS iegūšanai no vaiga uztriepes un FTA kartes (asins plankumi).Izmantojot mūsu uzņēmumu'Unikālā tikai DNS saturošā silīcija dioksīda membrānas centrifūgas kolonna un formula, apvienojumā ar Foregene Protease, augstas koncentrācijas augstas kvalitātes genoma DNS var iegūt 80 minūtēs.Speciāli izstrādātā mazā attīrīšanas kolonna saista genoma DNS, un DNS var eluēt ar nelielu daudzumu (15μl) eluēšanas sistēma, lai palielinātu iegūtās genoma DNS koncentrāciju, kas ir ērta pakārtotai noteikšanai vai eksperimentēšanai.Komplektā vienlaikus var apstrādāt vienu vai vairākus paraugus, un attīrīšanas procesā nav nepieciešama organisko vielu, piemēram, fenola, hloroforma, ekstrakcija un laikietilpīga izopropanola vai etanola nogulsnēšana, un darbība ir vienkārša un ietaupa laiku.
Specifikācijas
50 Sagatavošanās
Komplekta sastāvdaļas
| Buferis ST1 |
| Buferis ST2 |
| Lineārais akrilamīds |
| Buferis PW |
| Buferis WB |
| Buferis EB |
| Foregēna proteāze |
| Tikai DNS kolonna |
| Instrukcijas |
Īpašības un priekšrocības
-Nav RNāzes piesārņojuma: komplektā iekļautā kolonna, kas satur tikai DNS, ļauj noņemt RNS no genoma DNS, eksperimenta laikā nepievienojot RNāzi, izvairoties no laboratorijas piesārņošanas ar eksogēnu RNāzi.
-Ātrs ātrums: Foregene Protease ir augstāka aktivitāte nekā līdzīgām proteāzēm, ātri sagremo paraugus;vienkārša darbība.
-Ērti: centrifugēšana tiek veikta istabas temperatūrā, un nav nepieciešama DNS centrifugēšana 4 °C zemā temperatūrā vai etanola izgulsnēšana.
-Drošība: nav nepieciešama organiskā reaģenta ekstrakcija.
-Augsta kvalitāte: ekstrahētajai genoma DNS ir lieli fragmenti, nav RNS, nav RNāzes un ārkārtīgi zems jonu saturs, kas var atbilst dažādu eksperimentu prasībām.
-Mikroeluēšanas sistēma: tā var palielināt genoma DNS koncentrāciju, kas ir ērti pakārtotai noteikšanai vai eksperimentēšanai.
Komplekta pielietojums
Tas ir piemērots genoma DNS attīrīšanai no šādiem paraugiem: vaigu uztriepes, FTA karte (asins traipi).
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
-Šo komplektu var uzglabāt 12 mēnešus sausos apstākļos istabas temperatūrā (15-25°C);ja nepieciešams uzglabāt ilgāku laiku, var uzglabāt 2-8°C.
Piezīme. Uzglabājot zemā temperatūrā, šķīdums ir pakļauts nokrišņiem.Pirms lietošanas noteikti ievietojiet šķīdumu komplektā istabas temperatūrā uz laiku.Ja nepieciešams, uzsildiet to 37°C ūdens vannā 10 minūtes, lai izšķīdinātu nogulsnes, un pirms lietošanas samaisiet.
-Foregene Protease šķīdumam ir unikāla formula, kas ir aktīva, ilgstoši uzglabājot istabas temperatūrā (3 mēnešus);tā aktivitāte un stabilitāte būs labāka, uzglabājot 4°C, tāpēc ieteicams uzglabāt 4°C, atcerieties neglabāt -20°C.
Attīrīšanas kolonna ir aizsērējusi
Šajā komplektā genoma DNS ekstrakcijas operācijā attīrīšanas kolonna tiek tieši adsorbēta uz parauga fermentatīvās līzes maisījuma bez centrifugēšanas posma, un attīrīšanas kolonna var būt bloķēta nepilnīgas fermentācijas un parauga augstās viskozitātes dēļ.
Ir šādi iespējamie cēloņi:
1. Nepilnīga audu paraugu fermentatīvā šķelšana.
Ieteikums: Foregene Protease parauga apstrādes laiku var atbilstoši pagarināt vai paņemt supernatantu pēc centrifugēšanas ar ātrumu 12 000 apgr./min (~ 13 400 × g) 5 minūtes.
2. Pārmērīga audu paraugu vai lielu audu izmantošana.
Ieteikums: Vislabāk paraugā nedrīkst pārsniegt 1 vaiga tamponu;ja paraugs ir pārāk liels, attiecīgi palieliniet buferšķīduma ST1, Foregene Protease un bufera ST2 devu.
3. Parauga viskozitāte ir pārāk augsta.
Ieteikums: pirms genoma DNS ekstrakcijas paraugus var atbilstoši atšķaidīt ar 10 mM Tris-HCl.
4. Ir izsūkti asinskartes fragmenti.
Ieteikums: Asins plankumu (FTA Card) genoma ekstrakcijas 6. darbības pārejošo centrifugēšanas laiku var atbilstoši pagarināt.
Zema raža vai bez DNS
Bieži vien ir dažādi faktori, kas ietekmē genoma DNS iznākumu, tostarp parauga izcelsme, paraugu uzglabāšanas apstākļi, parauga sagatavošana, manipulācijas utt.
Ekstrakcijas laikā nevar iegūt genoma DNS
Iespējamie cēloņi ir šādi:
1. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārāk ilga uzglabāšana noved pie genoma DNS degradācijas.
Ieteikums: vēlams, lai no mutes uztriepes būtu svaigi ņemti paraugi, un nav ieteicams izmantot konservētus uztriepes genoma DNS ekstrakcijas operācijām;asins plankumu paraugiem jānodrošina kvalitatīva kvalitāte un uzglabāšanas laiks nedrīkst būt pārāk garš.
2. Ja tiek izmantots pārāk mazs audu daudzums, attiecīgā genoma DNS var netikt iegūta.
Ieteikums: ievērojiet darbības rokasgrāmatā sniegtos norādījumus par vaigu uztriepes paraugu ņemšanu un noslaukiet pēc iespējas vairāk reižu, lai mutes uztriepei varētu pievienot pietiekami daudz šūnu genoma DNS ekstrakcijai;asins plankumu parauga ekstrakcijai var attiecīgi palielināt asins plankumu griešanas laukumu.
3. Foregene Protease ir nepareizi konservēta, kā rezultātā tās aktivitāte samazinās vai inaktivējas.
Ieteikums: apstipriniet Foregene Protease uzglabāšanas nosacījumus vai nomainiet to ar jaunu Foregene Protease fermentatīvai reakcijai.
4. Nepareiza komplekta saglabāšana vai uzglabāšanas laiks ir pārāk garš, kā rezultātā dažas komplekta sastāvdaļas sabojājas.
Ieteikums: iegādājieties jaunu vaigu uztriepes DNS izolācijas komplektu saistītajām procedūrām.
5. Buferis WB nepievieno absolūto etanolu.
Ieteikums: pārliecinieties, ka buferis WB pievieno pareizo absolūtā etanola daudzumu.
6. Eluents nav pareizi pievienots silikona plēvei.
Ieteikums: Silikona membrānas vidū pievienojiet 65 °C iepriekš uzsildītu eluenta pilienus un atstājiet istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.
Izolēta zemas ražības genoma DNS
Ir šādi iespējamie cēloņi:
1. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārāk ilga uzglabāšana noved pie genoma DNS degradācijas.
Ieteikums: Mutes uztriepes vēlams ņemt svaigi, un konservētas uztriepes nedrīkst izmantot genoma DNS ekstrakcijai.
2. Ja audu parauga daudzums ir pārāk mazs, iegūtā genoma DNS saturs būs mazāks.
Ieteikums: ievērojiet lietošanas pamācībā sniegtos norādījumus par paraugu ņemšanu no mutes uztriepes, noslaukot pēc iespējas vairāk reižu, lai mutes uztriepei varētu pievienot pietiekami daudz šūnu genoma DNS ekstrakcijai.
3. Foregene Protease ir nepareizi konservēta, kā rezultātā tās aktivitāte samazinās vai inaktivējas.
Ieteikums: apstipriniet Foregene Protease uzglabāšanas nosacījumus vai nomainiet to ar jaunu Foregene Protease fermentatīvai reakcijai.
4. Eluenta problēmas.
Ieteikums: Eluēšanai izmantojiet buferšķīdumu EB;ja izmanto ddH2O vai citi eluenti, apstipriniet, ka eluāta pH ir no 7,0 līdz 8,5.
5. Eluāts nav pareizi pievienots pa pilienam.
Ieteikums: Pievienojiet eluenta pilienus silikona membrānas vidum un atstājiet istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.
6. Elucijas šķidrums uzkrājas pārāk maz.
Ieteikums: izmantojiet eluentu genoma DNS eluēšanai, kā prasīts instrukcijās, vismaz 15 μl.
Izolētās genoma DNS zema tīrība
Zema genoma DNS tīrība var izraisīt neveiksmi vai neapmierinošus pakārtoto eksperimentu rezultātus, piemēram: fermentus nevar izgriezt, PCR nevar iegūt interesējošo gēna fragmentu utt.
Iespējamie cēloņi ir šādi:
1. Heteroproteīnu piesārņojums, RNS piesārņojums.
Analīze: attīrīšanas kolonna netika mazgāta, izmantojot buferšķīdumu PW;Bufera PW mazgāšanas attīrīšanas kolonna netika mazgāta, izmantojot pareizo centrbēdzes ātrumu.
Ieteikums: pirms etanola pievienošanas pārliecinieties, ka supernatantā nav nokrišņu;noteikti izmazgājiet attīrīšanas kolonnu saskaņā ar instrukcijām, un šo darbību nevar izlaist.
2. Piemaisījumu jonu piesārņojums.
Analīze: Bufera WB mazgāšanas attīrīšanas kolonna tika izlaista vai mazgāta tikai vienu reizi, kā rezultātā radās atlikušais jonu piesārņojums.
Ieteikums: Noteikti mazgājiet Buffer WB 2 reizes, kā norādīts, lai pēc iespējas vairāk noņemtu atlikušos jonus.
3. RNS enzīmu piesārņojums.
Analīze: buferim tika pievienotas svešas RNāzes;Bufera PW mazgāšanas darbība bija nepareiza, kā rezultātā radās RNāzes atliekas, kas ietekmēja pakārtotās RNS eksperimentālās darbības, piemēram, in vitro transkripciju.
Ieteikums: Foregene sērijas nukleīnskābju izolācijas komplekti var noņemt RNS bez papildu RNāzes pievienošanas, tādējādi vaigu uztriepes/FTA kartes DNS izolācijas komplektam nav jāpievieno RNāze;noteikti ievērojiet norādījumus par Buffer PW mazgāšanas attīrīšanas kolonnu, un šo darbību nevar izlaist.
4. Etanola atlikums.
Analīze: Buferšķīdums WB neveica tukšas mēģenes centrifugēšanu pēc attīrīšanas kolonnas mazgāšanas.
Ieteikums: veiciet pareizu tukšas mēģenes centrifugēšanas darbību saskaņā ar instrukcijām.
5. Cits piemaisījumu piesārņojums.
Analīze: saglabātie paraugi vai īpašie paraugi netiek iepriekš apstrādāti.
Ieteikums: rūpīgi iepriekš apstrādājiet paraugu, kā norādīts.
