Cell Direct RT qPCR komplekts — Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready vienpakāpes qRT-PCR komplektu zonde
Apraksti
Šis produkts izmanto unikālu līzes bufera sistēmu, lai ātri atbrīvotu RNS no kultivētiem šūnu paraugiem RT-qPCR reakcijām, novēršot laikietilpīgo un darbietilpīgo RNS attīrīšanas procesu, un tikai 7 minūtes, lai iegūtu nepieciešamo RNS veidni, ar 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman, ko nodrošina komplekts, ātri iegūstot kvantitatīvus un reāllaika rezultātus.
5× Direct RT Mix un 2× Direct qPCR Mix-Taqman ir spēcīga inhibitoru tolerance un var veikt efektīvu apvērsumu un specifisku pastiprināšanu, izmantojot parauga lizātu, kas jāmēra kā veidni.Reaģents satur Foregene reverso transkriptāzi, Hot D-Taq DNS polimerāzi, dNTP, MgCl2, reakcijas buferis, PCR optimizētājs un stabilizators, ko var izmantot kopā ar līzes buferi, lai ātri un viegli noteiktu paraugus, un tam piemīt augstas jutības, specifiskuma un stabilitātes īpašības.
Specifikācijas
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komplekta sastāvdaļas
QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR komplekts-Taqman | ||||
Komplekta sastāvdaļas 20μl qPCR reakcijas sistēma | DRT-01021 | DRT-01022 | Piezīme | |
200 T | 1000 T | |||
daļa I | Buferis CL | 4 ml | 20 ml | Šūnu līze |
Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
Buferis ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
daļa II | DNS dzēšgumija | 80 μl | 400 μl | |
5 × Direct RT mix* | 160 μl | 800 μl | RT | |
2 × tiešais qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
20×ROX references krāsa | 40 μl | 200 μl | ||
RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
Instrukcijas | 1 gab | 1 gab |
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman var iegādāties atsevišķi
Īpašības un priekšrocības
■Vienkārši un efektīvi: ar Cell Direct RT tehnoloģiju RNS paraugus var iegūt tikai 7 minūtēs.
■ Izlases pieprasījums ir mazs, var pārbaudīt pat 10 šūnas.
■ Liela caurlaidspēja: tā var ātri noteikt RNS šūnās, kas kultivētas 384, 96, 24, 12, 6 bedrīšu plāksnēs.
■ DNS Eraser var ātri noņemt atbrīvotos genomus, ievērojami samazinot ietekmi uz turpmākajiem eksperimenta rezultātiem.
■ Optimizētā RT un qPCR sistēma padara divpakāpju RT-PCR reverso transkripciju efektīvāku un PCR specifiskāku un izturīgāku pret RT-qPCR reakcijas inhibitoriem.
Komplekta pielietojums
Pielietojuma joma: kultivētas šūnas.
- RNS, kas izdalās parauga līzes rezultātā: attiecas tikai uz šī komplekta RT-qPCR veidni.
- Komplektu var izmantot šādiem mērķiem: gēnu ekspresijas analīzei, siRNS mediētā gēnu klusēšanas efekta pārbaudei, zāļu skrīningam utt.
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Šī komplekta I daļa jāuzglabā 4℃;II daļa jāuzglabā -20 ℃.
Foregene Protease Plus II jāuzglabā 4℃, nesasaldēt pie -20 ℃.
2. reaģents×Direct qPCR Mix-Taqman jāuzglabā -20 temperatūrā℃tumsā;ja to lieto bieži, to var uzglabāt arī 4℃ īslaicīgai uzglabāšanai (izlietot 10 dienu laikā).
Reālā laika PCR primer dizaina principi
Forward Primer un Reverse Primer
Reāllaika PCR gadījumā primer dizains ir ļoti svarīgs.Praimeri ir saistīti ar PCR amplifikācijas specifiku un efektivitāti, un tos var veidot, pamatojoties uz šādiem principiem:
- Primer garums: 18-30bp.
- GC saturs: 40-60%.
- Tm vērtība: Primer projektēšanas programmatūra, piemēram, Primer 5, var norādīt gruntskrāsas Tm vērtību.Augšējā un lejtecē esošo primeru Tm vērtībām jābūt pēc iespējas tuvākām.Var izmantot arī Tm aprēķina formulu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Veicot PCR, par atkausēšanas temperatūru parasti tiek izvēlēta temperatūra, kas ir zemāka par primera Tm vērtību 5 °C (atbilstošs atkausēšanas temperatūras paaugstinājums var palielināt PCR reakcijas specifiku).
- Primeri un PCR produkti:
- Dizaina primer PCR amplifikācijas produkta garums ir vēlams 100-150 bp.
- Pēc iespējas jāizvairās no dizaina gruntēšanas veidnes sekundārajā strukturālajā zonā.
- Izvairieties no 2 vai vairāk komplementāru bāzu veidošanās starp augšpus un lejpus esošajiem gruntskrāsām 3′ galiem.
- Primer 3′ spailes pamatne nevar būt ar 3 papildu secīgiem G vai C.
- Pašiem praimeriem nevar būt komplementāras struktūras, pretējā gadījumā veidosies matadata struktūra, kas ietekmēs PCR amplifikāciju.
- ATCG ir jāsadala pēc iespējas vienmērīgāk primeru secībā, un jāizvairās no 3′ gala bāzes kā T.
Pielikums1:Cell TiešaisRT-qPCR Komplekta sastāvdaļat papildinājumu iepakojums
1. Šūnu līzes šķīdums
Šūnu līzes šķīdums | |||
Komplekta sastāvdaļas (24 bedrīšu līzes sistēma / iedobe) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
daļaes | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
daļaII | DNS dzēšgumija | 400 μl | 1 ml × 2 |
RT maisījums | |
Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5 × tiešā RT sajaukšana | 800 μl |
RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml × 2 |
qPCR maisījums | ||
Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
20× ROX atsauces krāsa | 40 μl | 200 μl |
RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Lietošanas rokasgrāmatas: