Šūnu kopējās RNS izolācijas komplekts Kopējais RNS izolācijas attīrīšanas komplekts no šūnas
Komplekta apraksts:
Augsti attīrītu un kvalitatīvu kopējo RNS var iegūt no dažādām kultivētām šūnām 11 minūtēs.
Bez RNāzes
Darbojas istabas temperatūrā (15-25℃)
Ar DNS tīrīšanas kolonnu
Augsta RNS raža
Ātri: pabeidziet ekstrakciju 11 minūtēs
Drošība: Nav Organiska ķīmiska viela
Apraksts
Šajā komplektā tiek izmantota Foregene izstrādātā centrifūga un formula, kas var efektīvi iegūt augstas tīrības un augstas kvalitātes kopējo RNS no šūnām, kas kultivētas 96, 24, 12 un 6 iedobju plāksnēs.
Komplekts nodrošina efektīvu DNS tīrīšanas kolonnu, kas var viegli atdalīt supernatantu un šūnu lizātu, saistīt un noņemt genoma DNS.Darbība ir vienkārša un ietaupa laiku.
TTikai RNS kolonna var efektīvi saistīt RNS ar unikālu formulu.Vienlaicīgi var apstrādāt lielu skaitu paraugu.
Komplekta sastāvdaļas
| Komplekta sastāvs | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buferis cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buferis RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Tikai RNS kolonna | 50 | 200 |
| DNS tīrīšanas kolonna | 50 | 200 |
| Instrukcija | 1 | 1 |
*Lūdzu, valkājiet cimdus un veiciet aizsardzības pasākumus darbības laikā, jo buferis cRL1 un buferis RW1 satur kairinošus haotropus sāļus.
Īpašības un priekšrocības
■ Viss process tiek darbināts istabas temperatūrā (15-25℃), bez ledus vannas un zemas temperatūras centrifugēšanas.
■ Viss komplekts nesatur RNāzes, nav jāuztraucas par RNS degradāciju.
■ DNS tīrīšanas kolonna īpaši saista DNS, lai komplekts varētu noņemt genoma DNS piesārņojumu, nepievienojot papildu DNāzi.
■ Augsts RNS iznākums: tikai RNS saturoša kolonna un unikāla formula var efektīvi attīrīt RNS.
■ Ātrs ātrums: viegli lietojams, un to var pabeigt 11 minūtēs.
■ Drošība: nav nepieciešams organiskais reaģents.
■ Augsta kvalitāte: attīrītā RNS ir augstas tīrības pakāpes, nesatur olbaltumvielas un citus piemaisījumus, un tā var atbilst dažādiem turpmākiem eksperimentiem.
Komplekta pielietojums
Tas ir piemērots kopējās RNS ekstrakcijai un attīrīšanai no kultivētām šūnām 96, 24, 12 un 6 bedrīšu plāksnēs.
Darba plūsma
Diagramma
Cell Total RNA Isolation Kit agarozes gēla akumulatora diagramma apstrādāja iepriekš minēto atšķirīgo šūnu skaitu, 20 μl tilpuma eluēšanu, ņem 2 μl attīrītas kopējās RNS 1%.
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Komplektu var uzglabāt 12 mēnešus istabas temperatūrā (15-25 ℃) vai 2-8 ℃ ilgāk (24 mēneši).
Buferšķīdumu cRL1 var uzglabāt 4 ℃ 1 mēnesi pēc 2-hidroksi-1-etāntiola pievienošanas (pēc izvēles).
RNS netiek ekstrahēta vai RNS iznākums ir zems
Bieži vien ir dažādi faktori, kas ietekmē atgūšanas efektivitāti, piemēram: audu parauga RNS saturs, darbības metode, eluēšanas tilpums utt.
1. Darbības laikā veikta ledus vanna vai kriogēnā (4 °C) centrifugēšana.
Ieteikums: Darbiniet istabas temperatūrā (15-25 ° C) visa procesa laikā, nelieciet ledus vannā un centrifugējiet zemā temperatūrā.
2. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārmērīgs paraugu uzglabāšanas laiks.
Ieteikums: Uzglabājiet paraugus -80 °C temperatūrā vai sasaldējiet šķidrā slāpeklī un izvairieties no atkārtotas sasaldēšanas-atkausēšanas;RNS ekstrakcijai mēģiniet izmantot svaigus audus vai kultivētas šūnas.
3. Nepietiekama parauga līze.
Ieteikums: homogenizējot audus, pārliecinieties, ka audi ir pietiekami homogenizēti un audu šūnas ir pietiekami sadalītas, lai izskaidrotu RNS izdalīšanos.
4. Eluents nav pievienots pareizi.
Ieteikums: apstipriniet, ka RNase-Free ddH2Attīrīšanas kolonnas membrānas vidum pa pilienam pievieno O.
5. Buferim RL2 vai Buferim RW2 netika pievienots pareizais absolūtā etanola daudzums.
Ieteikums: izpildiet norādījumus, pievienojiet pareizo absolūtā etanola daudzumu buferšķīdumam RL2 un Buffer RW2 un labi samaisiet pirms komplekta lietošanas.
6. Audu parauga deva nav piemērota.
Ieteikums: izmantojiet 10–20 mg audu vai (1–5) × 106šūnas uz 500 μl buferšķīduma RL1, jo pārmērīga audu izmantošana var samazināt RNS ekstrakciju.
7. Nepareizs eluēšanas tilpums vai nepilnīga eluēšana.
Ieteikums: attīrīšanas kolonnas eluēšanas tilpums ir 50-200 μl;ja eluēšanas efekts nav apmierinošs, pēc iepriekš uzkarsēta RNase-Free ddH pievienošanas ieteicams pagarināt novietošanas laiku istabas temperatūrā.2O, piemēram, 5-10 min.
8. Attīrīšanas kolonnā pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas ir etanola atlikumi.
Ieteikums: ja pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas, tukšas mēģenes centrifugēšanas 1 minūti ir etanola atliekas, tukšās mēģenes centrifugēšanas laiku var palielināt līdz 2 minūtēm vai arī attīrīšanas kolonnu var novietot istabas temperatūrā uz 5 minūtēm, lai adekvāti noņemtu atlikušo etanolu.
Attīrīta RNS tiek noārdīta
Attīrītās RNS kvalitāte ir saistīta ar tādiem faktoriem kā parauga saglabāšana, RNāzes piesārņojums un manipulācijas utt.
1. Audu paraugi netiek glabāti laikā.
Ieteikums: Ja audu paraugi vai šūnas pēc savākšanas netiek izmantotas laikus, nekavējoties iznīciniet -80 °C vai šķidrā slāpeklī.Lai ekstrahētu RNS, kad vien iespējams, izmantojiet tikko ņemtu audu vai šūnu paraugu.
2. Atkārtota audu paraugu sasaldēšana-atkausēšana.
Ieteikums: Uzglabājot audu paraugus, vislabāk tos sagriezt mazos gabaliņos konservēšanai un, tos lietojot, noņemt vienu no gabaliņiem, lai izvairītos no atkārtotas parauga sasaldēšanas-atkausēšanas un RNS noārdīšanās.
3. Operācijas laikā tiek ievadīta RNāze vai netiek valkāti vienreizējās lietošanas cimdi, maskas utt.
Ieteikums: RNS ekstrakcijas eksperimentus vislabāk veikt atsevišķās RNS manipulācijas telpās, un pirms eksperimenta galdu notīra.
Eksperimenta laikā valkājiet vienreizējās lietošanas cimdus un maskas, lai samazinātu RNS degradāciju, ko izraisa RNāzes ievadīšana.
4. Reaģenti lietošanas laikā ir piesārņoti ar RNāzi.
Ieteikums: nomainiet ar jaunu dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplektu saistītiem eksperimentiem.
5. RNS manipulācijās izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi utt. ir piesārņoti ar RNāzi.
Ieteikums: Pārliecinieties, ka RNS ekstrakcijā izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi, pipetes utt. nesatur RNāzes.
Attīrīta iegūtā RNS ietekmē pakārtotos eksperimentus
RNS, kas attīrīta ar attīrīšanas kolonnu, ja sāls joni, olbaltumvielu saturs ir pārāk liels, ietekmēs pakārtoto eksperimentu, piemēram: reversā transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluētajā RNS ir sāls jonu atliekas.
Ieteikums: apstipriniet, ka buferšķīdumam RW2 ir pievienots pareizais etanola daudzums, un veiciet 2 attīrīšanas kolonnas mazgāšanu ar darbībai norādīto centrbēdzes ātrumu;ja ir sāls jonu atlikumi, atstājiet attīrīšanas kolonnu buferšķīdumā RW2 uz 5 minūtēm istabas temperatūrā un veiciet centrifugēšanu, lai maksimāli noņemtu sāls piesārņojumu.
2. Etanola atlikums eluētajā RNS.
Ieteikums: Apstipriniet, ka pēc bufera RW2 mazgāšanas veiciet tukšas mēģenes centrifugēšanas darbību ar darbībai norādīto centrifugēšanas ātrumu, palieliniet tukšās mēģenes centrifugēšanas darbības laiku līdz 2 minūtēm, ja vēl ir etanola atlikumi, vai atstājiet to istabas temperatūrā 5 m.
