FAQ ir parDzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts

Tālāk ir sniegta to problēmu analīze, ar kurām jūs varat saskartiesdzīvnieku audu/šūnu RNS ekstrakcija will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNS netiek ekstrahēta vai RNS iznākums ir zems

Bieži vien ir dažādi faktori, kas ietekmē atgūšanas efektivitāti, piemēram: audu parauga RNS saturs, darbības metode, eluēšanas tilpums utt.

1. Darbības laikā veikta ledus vanna vai kriogēnā (4 °C) centrifugēšana.

Ieteikums: Darbiniet istabas temperatūrā (15-25 ° C) visa procesa laikā, nelieciet ledus vannā un centrifugējiet zemā temperatūrā.

2. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārmērīgs paraugu uzglabāšanas laiks.

Ieteikums: Uzglabājiet paraugus -80 °C temperatūrā vai sasaldējiet šķidrā slāpeklī un izvairieties no atkārtotas sasaldēšanas-atkausēšanas;RNS ekstrakcijai mēģiniet izmantot svaigus audus vai kultivētas šūnas.

3. Nepietiekama parauga līze.

Ieteikums: homogenizējot audus, pārliecinieties, ka audi ir pietiekami homogenizēti un audu šūnas ir pietiekami sadalītas, lai izskaidrotu RNS izdalīšanos.

4. Eluents nav pievienots pareizi.

Ieteikums: apstipriniet, ka RNase-Free ddH₂Attīrīšanas kolonnas membrānas vidum pa pilienam pievieno O.

5. Buferim RL2 vai Buferim RW2 netika pievienots pareizais absolūtā etanola daudzums.

Ieteikums: izpildiet norādījumus, pievienojiet pareizo absolūtā etanola daudzumu buferšķīdumam RL2 un Buffer RW2 un labi samaisiet pirms komplekta lietošanas.

6. Audu parauga deva nav piemērota.

Ieteikums: izmantojiet 10–20 mg audu vai (1–5) × 10⁶šūnas uz 500 μl buferšķīduma RL1, jo pārmērīga audu izmantošana var samazināt RNS ekstrakciju.

7. Nepareizs eluēšanas tilpums vai nepilnīga eluēšana.

Ieteikums: attīrīšanas kolonnas eluēšanas tilpums ir 50-200 μl;ja eluēšanas efekts nav apmierinošs, pēc iepriekš uzkarsēta RNase-Free ddH pievienošanas ieteicams pagarināt novietošanas laiku istabas temperatūrā.₂O, piemēram, 5-10 min.

8. Attīrīšanas kolonnā pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas ir etanola atlikumi.

Ieteikums: ja pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas, tukšas mēģenes centrifugēšanas 1 minūti ir etanola atliekas, tukšās mēģenes centrifugēšanas laiku var palielināt līdz 2 minūtēm vai arī attīrīšanas kolonnu var novietot istabas temperatūrā uz 5 minūtēm, lai adekvāti noņemtu atlikušo etanolu.

Attīrīta RNS tiek noārdīta

Attīrītās RNS kvalitāte ir saistīta ar tādiem faktoriem kā parauga saglabāšana, RNāzes piesārņojums un manipulācijas utt.

1. Audu paraugi netiek glabāti laikā.

Ieteikums: Ja audu paraugi vai šūnas pēc savākšanas netiek izmantotas laikus, nekavējoties iznīciniet -80 °C vai šķidrā slāpeklī.Lai ekstrahētu RNS, kad vien iespējams, izmantojiet tikko ņemtu audu vai šūnu paraugu.

2. Atkārtota audu paraugu sasaldēšana-atkausēšana.

Ieteikums: Uzglabājot audu paraugus, vislabāk tos sagriezt mazos gabaliņos konservēšanai un, tos lietojot, noņemt vienu no gabaliņiem, lai izvairītos no atkārtotas parauga sasaldēšanas-atkausēšanas un RNS noārdīšanās.

3. Operācijas laikā tiek ievadīta RNāze vai netiek valkāti vienreizējās lietošanas cimdi, maskas utt.

Ieteikums: RNS ekstrakcijas eksperimentus vislabāk veikt atsevišķās RNS manipulācijas telpās, un pirms eksperimenta galdu notīra.

Eksperimenta laikā valkājiet vienreizējās lietošanas cimdus un maskas, lai samazinātu RNS degradāciju, ko izraisa RNāzes ievadīšana.

4. Reaģenti lietošanas laikā ir piesārņoti ar RNāzi.

Ieteikums: nomainiet ar jaunu dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplektu saistītiem eksperimentiem.

5. RNS manipulācijās izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi utt. ir piesārņoti ar RNāzi.

Ieteikums: Pārliecinieties, ka RNS ekstrakcijā izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi, pipetes utt. nesatur RNāzes.

Attīrīta iegūtā RNS ietekmē pakārtotos eksperimentus

RNS, kas attīrīta ar attīrīšanas kolonnu, ja sāls joni, olbaltumvielu saturs ir pārāk liels, ietekmēs pakārtoto eksperimentu, piemēram: reversā transkripcija, Northern Blot et al.

1. Eluētajā RNS ir sāls jonu atliekas.

Ieteikums: apstipriniet, ka buferšķīdumam RW2 ir pievienots pareizais etanola daudzums, un veiciet 2 attīrīšanas kolonnas mazgāšanu ar darbībai norādīto centrbēdzes ātrumu;ja ir sāls jonu atlikumi, atstājiet attīrīšanas kolonnu buferšķīdumā RW2 uz 5 minūtēm istabas temperatūrā un veiciet centrifugēšanu, lai maksimāli noņemtu sāls piesārņojumu.

2. Etanola atlikums eluētajā RNS.

Ieteikums: Apstipriniet, ka pēc bufera RW2 mazgāšanas veiciet tukšas mēģenes centrifugēšanas darbību ar darbībai norādīto centrifugēšanas ātrumu, palieliniet tukšās mēģenes centrifugēšanas darbības laiku līdz 2 minūtēm, ja vēl ir etanola atlikumi, vai atstājiet to istabas temperatūrā 5 minūtes pēc tukšas mēģenes centrifugēšanas, lai maksimāli noņemtu etanola atlikumus.

Nulceīnskābes paraugu veidu izolācija

Foregene RNS izolācijas komplekti var iegūt pilnīgu RNS izolāciju/ekstrakciju no šādām paraugu mērcēm: dzīvnieku audi, augi, šūnas, vīrusi, asinis utt.

Kā uzglabāt komplektu

Uzglabāšana istabas temperatūrā 24 mēnešus.