• facebook
  • linkedin
  • youtube

Vaigu uztriepes/FTA kartes DNS ekstrakcijas komplekts

Tālāk ir sniegta iespējamo problēmu analīzeBukālstampons/BTN card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Attīrīšanas kolonna ir aizsērējusi

 

 

Šajā komplektā genoma DNS ekstrakcijas operācijā attīrīšanas kolonna tiek tieši adsorbēta uz parauga fermentatīvās līzes maisījuma bez centrifugēšanas posma, un attīrīšanas kolonna var būt bloķēta nepilnīgas fermentācijas un parauga augstās viskozitātes dēļ.

Ir šādi iespējamie cēloņi:

1. Nepilnīga audu paraugu fermentatīvā šķelšana.

Ieteikums: Foregene Protease parauga apstrādes laiku var atbilstoši pagarināt vai supernatantu var ņemt pēc centrifugēšanas pie 12 000 apgr./min (~13 400× g) 5 minūtes.

2. Pārmērīga audu paraugu vai lielu audu izmantošana.

Ieteikums: vislabāk ir nepārsniegt 1Bukāls tampons paraugā;ja paraugs ir pārāk liels, attiecīgi palieliniet buferšķīduma ST1, Foregene Protease un bufera ST2 devu.

3. Parauga viskozitāte ir pārāk augsta.

Ieteikums: pirms genoma DNS ekstrakcijas paraugus var atbilstoši atšķaidīt ar 10 mM Tris-HCl.

4. Ir izsūkti asinskartes fragmenti.

Ieteikums: Asins plankumu (FTA Card) genoma ekstrakcijas 6. darbības pārejošo centrifugēšanas laiku var atbilstoši pagarināt.

 

Zema raža vai bez DNS

 

Bieži vien ir dažādi faktori, kas ietekmē genoma DNS iznākumu, tostarp parauga izcelsme, paraugu uzglabāšanas apstākļi, parauga sagatavošana, manipulācijas utt.

Ekstrakcijas laikā nevar iegūt genoma DNS

Iespējamie cēloņi ir šādi:

1. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārāk ilga uzglabāšana noved pie genoma DNS degradācijas.

Ieteikums: vēlams, lai no mutes uztriepes būtu svaigi ņemti paraugi, un nav ieteicams izmantot konservētus uztriepes genoma DNS ekstrakcijas operācijām;asins plankumu paraugiem jānodrošina kvalitatīva kvalitāte un uzglabāšanas laiks nedrīkst būt pārāk garš.

2. Ja tiek izmantots pārāk mazs audu daudzums, attiecīgā genoma DNS var netikt iegūta.

Ieteikums: ievērojietbuccal operāciju rokasgrāmatā norādītās uztriepes paraugu ņemšanas instrukcijas un noslaukiet pēc iespējas vairāk reižu, lai mutes uztriepei varētu pievienot pietiekami daudz šūnu genoma DNS ekstrakcijai;asins plankumu parauga ekstrakcijai var attiecīgi palielināt asins plankumu griešanas laukumu.

3. Foregene Protease ir nepareizi konservēta, kā rezultātā tās aktivitāte samazinās vai inaktivējas.

Ieteikums: Apstipriniet uzglabāšanas nosacījumusFOregene Protease vai aizstāj to ar jaunu Foregene Protease fermentatīvai reakcijai.

4. Nepareiza komplekta saglabāšana vai uzglabāšanas laiks ir pārāk garš, kā rezultātā dažas komplekta sastāvdaļas sabojājas.

Ieteikums: iegādājieties jaunuBukāls uztriepes DNSizolācija komplekts saistītajām procedūrām.

5. Buferis WB nepievieno absolūto etanolu.

Ieteikums: pārliecinieties, ka buferis WB pievieno pareizo absolūtā etanola daudzumu.

6. Eluents nav pareizi pievienots silikona plēvei.

Ieteikums: pievienot 65°Ciepriekš uzsildīts eluents nokrīt līdz silikona membrānas vidum un atstāj istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.

Lzemas ražas genoma DNS izolēts

Ir šādi iespējamie cēloņi:

1. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārāk ilga uzglabāšana noved pie genoma DNS degradācijas.

Ieteikums: Mutes uztriepes vēlams ņemt svaigi, un konservētas uztriepes nedrīkst izmantot genoma DNS ekstrakcijai.

2. Ja audu parauga daudzums ir pārāk mazs, iegūtā genoma DNS saturs būs mazāks.

Ieteikums: ievērojiet lietošanas pamācībā sniegtos norādījumus par paraugu ņemšanu no mutes uztriepes, noslaukot pēc iespējas vairāk reižu, lai mutes uztriepei varētu pievienot pietiekami daudz šūnu genoma DNS ekstrakcijai.

3. Foregene Protease ir nepareizi konservēta, kā rezultātā tās aktivitāte samazinās vai inaktivējas.

Ieteikums: Apstipriniet uzglabāšanas nosacījumusthe Foregene Protease vai nomainiet to ar jaunu Foregēna proteāze fermentatīvai reakcijai.

4. Eluenta problēmas.

Ieteikums: Eluēšanai izmantojiet buferšķīdumu EB;ja izmanto ddH2O vai citi eluenti, apstipriniet, ka eluāta pH ir no 7,0 līdz 8,5.

5. Eluāts nav pareizi pievienots pa pilienam.

Ieteikums: Pievienojiet eluenta pilienus silikona membrānas vidum un atstājiet istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.

6. Elucijas šķidrums uzkrājas pārāk maz.

Ieteikums: genoma DNS eluēšanai izmantojiet eluentu, kā noteikts instrukcijās, vismazne mazāk nekā 15μl.

Lak tīrība of genoma DNSizolēts

Zema genoma DNS tīrība var izraisīt neveiksmi vai neapmierinošus pakārtoto eksperimentu rezultātus, piemēram: fermentus nevar izgriezt, PCR nevar iegūt interesējošo gēna fragmentu utt.

Iespējamie cēloņi ir šādi:

1. Heteroproteīnu piesārņojums, RNS piesārņojums.

Analīze: attīrīšanas kolonna netika mazgāta, izmantojot buferšķīdumu PW;Bufera PW mazgāšanas attīrīšanas kolonna netika mazgāta, izmantojot pareizo centrbēdzes ātrumu.

Ieteikums: pirms etanola pievienošanas pārliecinieties, ka supernatantā nav nokrišņu;noteikti izmazgājiet attīrīšanas kolonnu saskaņā ar instrukcijām, un šo darbību nevar izlaist.

2. Piemaisījumu jonu piesārņojums.

Analīze: Bufera WB mazgāšanas attīrīšanas kolonna tika izlaista vai mazgāta tikai vienu reizi, kā rezultātā radās atlikušais jonu piesārņojums.

Ieteikums: Noteikti mazgājiet Buffer WB 2 reizes, kā norādīts, lai pēc iespējas vairāk noņemtu atlikušos jonus.

3. RNS enzīmu piesārņojums.

Analīze: buferim tika pievienotas svešas RNāzes;Bufera PW mazgāšanas darbība bija nepareiza, kā rezultātā radās RNāzes atliekas, kas ietekmēja pakārtotās RNS eksperimentālās darbības, piemēram, in vitro transkripciju.

Ieteikums: Foregene sērijas nukleīnskābeizolakomplekti var noņemt RNS bez papildu RNāzes pievienošanas,tādējādi vaigu uztriepes/FTA kartes DNS izolācijas komplektsnepieciešams't pievienot RNāzi;noteikti ievērojiet norādījumus par Buffer PW mazgāšanas attīrīšanas kolonnu, un šo darbību nevar izlaist.

4. Etanola atlikums.

Analīze: Buferšķīdums WB neveica tukšas mēģenes centrifugēšanu pēc attīrīšanas kolonnas mazgāšanas.

Ieteikums: veiciet pareizu tukšas mēģenes centrifugēšanas darbību saskaņā ar instrukcijām.

5. Cits piemaisījumu piesārņojums.

Analīze: saglabātie paraugi vai īpašie paraugi netiek iepriekš apstrādāti.

Ieteikums: rūpīgi iepriekš apstrādājiet paraugu, kā norādīts.

 


Izlikšanas laiks: 18-2022. gada marts