W:Brother, reversā transkripcija ir pabeigta, un visbeidzot pēdējais solis – fluorescējošā kvantitatīvā PCR!Ei, brāli, kas ir reāllaika kvantitatīvais PCR?
M: PCR jūs vienmēr zināt, vai ne?
W: Jūs zināt, PCR ir polimerāzes ķēdes reakcija, un tā ir tehnoloģija, kas palielina DNS!
M: Tas ir gandrīz… Tā ir tehniska metode mērķa secības pastiprināšanai līdz vairāk nekā vienam miljonam reižu, izmantojot specifiskus primerus, taču tas tikai norāda uz mērķa sekvences esamību vai neesamību un nevar noteikt sākotnējās veidnes daudzumu.Fluorescences kvantitatīvā PCR ir tehniska metode, kas izstrādāta šīs problēmas risināšanai.Reālā laika PCR un daudzuma PCR (qPCR) parasti attiecas uz to.
W: Atšķirība no parastās PCR slēpjas fluorescences kvantitatīvā noteikšanā?
M: Jā, tas ir, katra PCR cikla pagarinājuma posmā tiek noteikta fluorescences signāla intensitāte, un sākotnējo veidnes daudzumu var aprēķināt atbilstoši signāla intensitātes izmaiņām.
V: Tas šķiet tik sarežģīti!Vai man tas ir jāaprēķina pašam?
M: Tas prasa jums mācīties lēnām, vislabāk ir saprast principu.Tagad vispirms varat koncentrēties uz CT vērtību, kas ir salīdzinoši intuitīvi eksperimentāli dati, un tās lielums atbilst sākotnējās veidnes apjoma lielumam.Ir arī grafiki, piemēram, pastiprināšanas līknes un kušanas līknes.Viņiem ir pēdējais vārds par to, vai jūsu eksperiments ir veiksmīgs vai nē.
V: Ak, brālīt.Tad es taisos veikt qPCR eksperimentu!
M: Pievērsiet īpašu uzmanību, lai nepievienotu veidnes reaģenta zonai, pretējā gadījumā jūsu neizmantotais maisījums būs viegli piesārņots!
W: Sapratu!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Augstāka efektivitāte, lielāka specifika
Augsta jutība, laba saderība