• facebook
  • linkedin
  • youtube

PCR dzimšana

PCR (polimerāzes ķēdes reakcija)

Ir pagājuši vairāk nekā 30 gadi kopš polimerāzes ķēdes reakcijas izgudrošanas.Vairāk nekā 30 gadus pēc tam, kad daudzi zinātnieki visā pasaulē turpina papildināt un uzlabot, PCR tehnoloģija ir kļuvusi par visplašāk un biežāk izmantoto un vissvarīgāko fundamentālo pētījumu metodi visā dzīvības zinātņu jomā.

TouchDown PCR, reāllaika PCR, Multi PCR utt., kas izstrādāti, pamatojoties uz plašo tradicionālās PCR tehnoloģijas pielietojumu, kā arī jaunizveidotā digitālā PCR (digitālā PCR), ir ievērojami bagātinājusi vairuma zinātnisko pētnieku pētniecības metodes un ievērojami paātrinājusi mūsdienu dzīvības zinātņu, īpaši molekulārās bioloģijas, attīstības procesu, ir devusi lielu ieguldījumu cilvēka dzīves un dabas pētījumos.

PCR princips
Polimerāzes ķēdes reakcijas PCR

Tradicionālās PCR tehnoloģijas defekti

Kompleksā nukleīnskābju atdalīšana unekstrakcija:

★ Tradicionālā PCR tehnoloģija: nepieciešama

★ No PCR iegūta tehnoloģija: nepieciešama

★ DNS un RNS paraugi: lielas atšķirības, sarežģītas darbības prasības

★ Bīstamība ķermenim: toksiski reaģenti kaitē ķermenim

640

Tradicionālajai PCR tehnoloģijai un atvasinājumu tehnoloģijai ir priekšnoteikums — nukleīnskābju atdalīšana un attīrīšana

Jebkurš bioloģiskais paraugs ir jāiziet cauri sarežģītai un nogurdinošai paraugu apstrādei, lai iegūtu nukleīnskābju paraugus, kas atbilst PCR tehnoloģijas prasībām.

DNS un RNS atdalīšana un ekstrakcija vienmēr ir bijis pamatuzdevums, kas attiecīgiem zinātniskajiem pētniekiem ir jāatkārto katru dienu.

Milzīgo atšķirību dēļ starp paraugiem arī DNS un RNS atdalīšanas un ekstrakcijas procesi ir ļoti atšķirīgi.Šis darbs operatoriem prasa augstu tehnisko iemaņu līmeni.Tradicionālās atdalīšanas un ekstrakcijas metodes prasa ilgstošu saskari ar dažiem ļoti toksiskiem ķīmiskiem reaģentiem.Tas radīs neatgriezeniskus bojājumus operatora ķermenim un pat radīs tiešus bojājumus eksperimenta laikā.

5. lpp

Tajā pašā laikā tiem, kam ir liels pētāmo paraugu skaits, nukleīnskābju atdalīšana un ekstrakcija ir darbietilpīgs darbs.

Nukleīnskābju izolācijas un ekstrakcijas komplekti tirgū tagad ir nobrieduši, un ir daudz zīmolu, taču tie ir aptuveni vienādi.Neatkarīgi no tā, vai tas ir silikagēla membrānas kolonnas centrbēdzes komplekts vai magnētisko lodīšu metodes komplekts, tas aizņem daudz laika un ir dārgi.Papildus komplekta izmaksām ir arī īpašas prasības laboratorijas aprīkojumam.Magnētiskās lodītes metodē izmantotā automatizētā darbstacija ir ļoti tipiska liela mēroga augstvērtīga iekārta, kas laboratorijai ir milzīgi izdevumi.

7. lpp

Kopsavilkumā

Pirms PCR eksperimentu veikšanas paraugu pirmapstrāde pētniekiem ir neizbēgama un vienmēr galvassāpes.Kā atrisināt šo problēmu un vai PCR eksperimentus var veikt bez nukleīnskābju atdalīšanas un ekstrakcijas, vienmēr ir bijusi lielākā daļa zinātnieku un klīnisko laboratoriju darbinieku.

Foregene risinājums

Pēc gadiem ilgiem rūpīgiem pētījumiem par tiešo PCR tehnoloģiju un saistītajiem komplektiem, Forgene veiksmīgi pārvarēja daudzas vājās vietas un veiksmīgi panāca tiešu PCR daudzu veidu dažādiem paraugiem ar spēcīgu pretestību un pielāgošanās spēju, ļaujot pētniekiem atbrīvoties no apgrūtinošas un bīstamas nukleīnskābju atdalīšanas un ekstrakcijas.Tas ievērojami samazinās katra darba intensitāti, paātrinās eksperimentu procesu un ietaupīs zinātniskās izpētes un testēšanas izmaksas.

Forgene izpratne un zināšanas par DirectPCR

Pirmkārt, DirectPCR tehnoloģija ir tieša PCR tehnoloģija dažādiem bioloģisko paraugu audiem.Šajā tehniskajā stāvoklī nav nepieciešams atdalīt un ekstrahēt nukleīnskābes, un audu paraugs tiek tieši izmantots kā objekts, un PCR reakcijai tiek pievienoti mērķa gēnu praimeri.

Otrkārt, DirectPCR tehnoloģija ir ne tikai tradicionāla DNS veidņu amplifikācijas tehnoloģija, bet arī ietver RNS veidnes reversās transkripcijas PCR.

Treškārt, DirectPCR tehnoloģija ne tikai tieši veic ikdienas kvalitatīvas PCR reakcijas uz audu paraugiem, bet arī ietver reāllaika qPCR reakcijas, kas prasa reakcijas sistēmai spēcīgu spēju pretoties fona fluorescences traucējumiem un antagonizēt endogēnos fluorescences slāpētājus.

Ceturtkārt, audu paraugiem, uz kuriem attiecas DirectPCR tehnoloģija, ir nepieciešama tikai nukleīnskābju šablonu atbrīvošana un tie neizņem proteīnus, polisaharīdus, sāls jonus utt., kas traucē PCR reakciju.Tas prasa, lai reakcijas sistēmā esošajai nukleīnskābes polimerāzei un PCR maisījumam būtu lieliska pretreversibilitāte un pielāgošanās spēja, un tas var nodrošināt fermentu aktivitāti un replikācijas precizitāti sarežģītos apstākļos.

Piektkārt, audu paraugi, uz kuriem attiecas DirectPCR tehnoloģija, nav pakļauti nukleīnskābju bagātināšanas apstrādei, un veidnes daudzums ir ļoti mazs, kas prasa ārkārtīgi augstu reakcijas sistēmas jutību un pastiprināšanas efektivitāti.

Secinājums

DirectPCR tehnoloģija ir viens no svarīgākajiem tehnoloģiskajiem sasniegumiem un inovācijām pēdējo 30 gadu laikā kopš PCR tehnoloģijas dzimšanas.Forgene ir un arī turpmāk būs šīs tehnoloģijas pionieris un novators.

DirectPCR tehnoloģijas pielietošanas iespējas ir ļoti plašas.Šīs tehnoloģijas nepārtraukta uzlabošana un veicināšana noteikti radīs graujošas izmaiņas zinātniskajā pētniecībā un pārbaudes darbā.Šī ir PCR tehnoloģiju revolūcija.


Ievietošanas laiks: 21.02.2017