• facebook
  • linkedin
  • youtube

1: savlaicīgi nomainiet eksperimentālos materiālus

news812 (1) 

Iestatiet (NTC) negatīvo kontroli un atkārtojiet to daudzas reizes.Kad tiek konstatēts, ka laboratorijā ir PCR produkta piesārņojums, savlaicīgi nomainiet visus eksperimentālos materiālus.Piemēram: atkārtoti atšķaidiet un sagatavojiet primerus, atkārtoti sterilizējiet pipetes galu, EP cauruli, ddH2O utt., nomainiet ar jaunu pipeti un uz laiku aizņemieties citas laboratorijas, lai veiktu PCR eksperimentus.Piesārņoto laboratoriju pirms eksperimenta turpināšanas vēdina un apstaro ar ultravioletajiem stariem, līdz tiek novērsts PCR produkta piesārņojums.

2: Pagariniet UV iedarbības laiku

news812 (2)

Ir vērts atzīmēt, ka, lai noņemtu DNS piesārņojumu, regulārais ultravioletais starojums jāpagarina par 2 stundām nekā parasti.Tomēr UV starojuma ietekme uz nelielu DNS piesārņojuma fragmentu (zem 200 bp) noņemšanu joprojām nav laba.

Ultravioletā viļņa garums (nm) parasti ir 254/300 nm, un tas ir pietiekami, lai apstarotu 30 minūtes.Jāņem vērā, ka, izvēloties UV, lai novērstu atlikušo PCR produktu piesārņojumu, jāņem vērā PCR produkta garums un bāzu sadalījums produktu secībā.UV apstarošana ir efektīva tikai gariem fragmentiem, kas pārsniedz 500 bp, un maz ietekmē īsus fragmentus.

UV starojuma laikā PCR produktā esošās pirimidīna bāzes veidos dimērus.Šie dimēri var pārtraukt pagarinājumu, bet ne visi pirimidīni DNS ķēdē var veidot dimērus, un UV starojums var arī salauzt dimērus..Dimēra veidošanās pakāpe ir atkarīga no UV viļņa garuma, pirimidīna dimēra veida un dimēra vietai blakus esošo nukleotīdu secības.Tāpēc, ja PCR pastiprinātie fragmenti ir mazi, ieteicams izmantot UNG anti-PCR produktu piesārņojuma sistēmu.

3: plaši izmantotie DNS piesārņojuma iznīcinātāji

news812 (3)

Aerosoli viegli rodas, pievienojot pipetes, no kā ir grūti izvairīties, un tas ātri nogulsnējas.Tāpēc neapšaubāmi laba izvēle ir bieži izmantot īpašus DNS piesārņojuma uztvērējus, lai novērstu DNS piesārņojuma izplatīšanos.

4: izmantojiet UNG pretpiesārņojuma sistēmu

news812 (4)

Pēc PCR produkta piesārņojuma noņemšanas testēšanas laboratorija var izmantot UNG anti-PCR produktu piesārņojuma sistēmu, lai novērstu PCR produkta piesārņojumu.Vispārējās laboratorijās varat veikt vienkāršus eksperimentālus nodalījumus, stingri nošķirt PCR produktu apgabalu no citām jomām, izveidot noteiktus laboratorijas noteikumus un noteikumus un veikt attiecīgu apmācību, lai novērstu PCR produkta piesārņojumu.

Ieteikumi: saprātīgas PCR laboratorijas izveide, labas PCR vides uzturēšana, standarta PCR darbības procedūru formulēšana un eksperimentētāju stingras darbības izpratnes veicināšana ir atslēgas, lai novērstu vai samazinātu PCR eksperimentu radīto piesārņojumu.


Publicēšanas laiks: 12. augusts 2021