Cik daudz jūs zināt

Par Nukleīnskābes ekstrakcija

Attīrītas nukleīnskābes sākums un beigas

Viss sākumā ir grūti, visvairāk ir attīrīta nukleīnskābe

Molekulāro eksperimentu uzsākšana turpmākajiem eksperimentiem

Panākumiem vai neveiksmēm ir izšķiroša ietekme.

Trace/ultra-trace UV spektrofotometru iecienījuši daudzi zinātniskie pētnieki, jo tas var vienkārši, ātri un ekonomiski noteikt nukleīnskābju koncentrāciju un olbaltumvielu un sāļu jonu atlikumus.

Kā mēs visi zinām, A260 nozīmē nukleīnskābju absorbcijas OD vērtību, A280 nozīmē proteīna koncentrācijas absorbcijas OD vērtību, A230 nozīmē sāls jonu koncentrācijas absorbcijas OD vērtību, tāpēc A260 var pārveidot nukleīnskābju koncentrāciju, A260/280 nozīmē proteīna atlikumu, A260/230 nozīmē sāls jonu atlikumu, A260/230 nozīmē sāls jonu atlikumu, bet tas ir tikai liels skaits mērījumu, un tas ir tikai noteikums.vispārpieņemtais” ticēt, ka tas var izskaidrot DNS un RNS tīrībuzināmā mērā.Tas nav vienīgais standarts nukleīnskābju iznākuma un tīrības noteikšanai, tas tiek izmantots tikai kā atsauce, un tas nav “zelta standarts”.

Thermo Fisher ND-2000 rokasgrāmata uzsver testa rezultātu uzticamību

Iemesls ir tāds, ka rezultāti, kas iegūti, izmantojot mikro/ultramikro UV spektrofotometru, atspoguļo tikai nukleīnskābes iznākumu un tīrību no sāniem, un ir daudz ietekmējošo faktoru (optiskais ceļš, parauga tilpums, parauga koncentrācija, pH vērtība, citi joni, kas ietekmē absorbcijas mērījumus utt.), izmērītā OD vērtība ne vienmēr ir precīza.Tajā pašā laikā absorbcijas vērtības noteikšanas materiāla specifiskuma trūkuma dēļ vienpavediena DNS, divpavedienu DNS, RNS, dNTP un dažiem proteīniem ir absorbcijas maksimumi 260 nm viļņa garumā, un koncentrācija, ko nosaka tikai A260, ne vienmēr ir īstā DNS vai RNS.Koncentrāciju un tās integritāti un degradāciju nevar spriest.

Tātad, kā spriest par mūsu attīrītās nukleīnskābes kvalitāti?Papildus mikro/ultramikro UV spektrofotometra izmantošanai noteikšanai ir nepieciešamas arī tādas metodes kā agarozes gēla elektroforēze, lai vizuāli parādītu nukleīnskābes tīrību un integritāti un noteiktu koncentrāciju.Tādā veidā nukleīnskābju iznākums un tīrība, kas iegūta no dažādu metožu noteikšanas rezultātiem, ir ticama.

Eksperimentālo diagrammu salīdzinājums

H1299 šūnu genoma DNS tika ekstrahēta, izmantojot uzņēmuma A DNS ekstrakcijas komplektus, un tika novērots ievērojams piemaisījumu piesārņojums, kā rezultātā tika iegūtas augstas OD vērtības.

(OD mērījumu vērtība un atbilstošā elektroferogramma)

Novērtēšanas indekss

Vai pastāv "zelta standarts" nukleīnskābju ieguvei un kvalitātes pārbaudei?

Cik zināms, vienkāršas, ātras un lētas metodes nav.Neatkarīgi no tā, vai tas ir spektrofotometrs, gēla elektroforēze vai masas spektrometrija, tie visi atspoguļo nukleīnskābes koncentrāciju un tīrību šķīdumā no dažādiem aspektiem, un tie ir jāvērtē, atsaucoties viens uz otru.

Labākais novērtējuma indekss vienmēr irpēcpārbaudes eksperimentālais pielietojums.Tas neietekmē reversās transkripcijas un PCR amplifikācijas efektivitāti.Uzticamu amplifikācijas produktu un Ct vērtību iegūšana un pilnīgas secības iegūšana ar sekvencēšanu ir veiksmīga nukleīnskābes ekstrakcija.

Rezumējot, tikai attiecību teorijas viedoklis ir jāapstrīd ar uzskatu “labu pakārtoto eksperimentālo rezultātu izmantošana kā labi ieguves parametri”!

Ieteicamie Foregene DNS RNS ekstrakcijas komplekti, lai iegūtu augstu DNS/RNS tīrību:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/