PCR metodes un nukleīnskābju aerosola piesārņojums nukleīnskābju testēšanas laboratorijās ir kā medaļas divas puses.Mēs varam tikai izvēlēties iegūt vai nē, bet mēs nevaram izvēlēties, vai mēs to gribam vai tērējam.

1. DNS noņēmēja skrīnings

Lai panāktu nukleīnskābju aerosola piesārņojuma telpisku noņemšanu, vispirms ir jāizņem DNS noņemšanas līdzekļi, kas var noņemt nukleīnskābes šķidrā stāvoklī.Jo nav daudz tādu DNS noņemšanas līdzekļu, kas patiešām darbojas.Eksperimentālo metodi, lūdzu, skatiet: DNS noņemšanas līdzeklis nevar būt laboratorijas "slepenais stūrītis"!

Šajā eksperimentā 100 kopijas/μL (CT aptuveni 31) ASFV plazmīdas un DNS noņēmēja, kas kvantitatīvi noteiktas ar digitālo PCR, tika sajaukti vienādos tilpumos un pēc tam reaģēja istabas temperatūrā attiecīgi 10 minūtes, 20 minūtes un 30 minūtes.Pēc nukleīnskābes ekstrakcijas tika veikta qPCR amplifikācija.Tika salīdzināta pozitīvā kontrole, kas sajaukta ar plazmīdu un ūdeni.Tā kā eksperiments netika pabeigts vienlaikus, starp rezultātiem var būt zināma novirze, taču tas neietekmē eksperimenta noslēgumu.Līdz šim esmu novērtējis 10 komerciālus DNS noņemšanas produktus.Tikai produkti Nr. 1, Nr. 6 un Nr. 8 var efektīvi noārdīt plazmīdas DNS šķidrā stāvoklī.Citiem produktiem gandrīz nav nekādas ietekmes.

1. tabula Komerciāli pieejamā DNS noņēmēja nukleīnskābju noņemšanas efekts

2. Bieži lietoto dezinfekcijas līdzekļu DNS noņemšanas efekta eksperiments

1. Bieži lietoto dezinfekcijas līdzekļu pārbaude

Laboratorijās parasti izmanto daudzu veidu dezinfekcijas līdzekļus: aldehīdus, fenolus, spirtus, kvaternāros amonija sāļus, peroksīdus, hlora preparātus, kā arī skābes un bāzes.Šo dezinfekcijas līdzekļu dezinfekcijas ietekme uz mikroorganismiem ir pilnībā pārbaudīta eksperimentos, taču nav pietiekamu eksperimentālu datu par nukleīnskābju noārdīšanās efektu.Nukleīnskābju testēšanas laboratorijām ir nepieciešams dezinfekcijas līdzeklis, kas ne tikai labi dezinficē mikroorganismus, bet arī var noārdīt DNS.Pārbaudes rezultāti liecina, ka prasībām atbilst tikai divi hlora preparāti no 84 dezinfekcijas līdzekļa un trihlorizocianūrskābes un 1 M sālsskābes.Tā kā 1 M sālsskābe ir ļoti kodīga, hlora preparātus ieteicams izmantot kā atkritumu iznīcināšanu nukleīnskābju testēšanas laboratorijās.Tomēr hlora preparāti ir kodīgi pret metāliem, un tos nevar izmantot instrumentu un iekārtu dezinfekcijai.

2. tabula dažādu veidu dezinfekcijas līdzekļu DNS noņemšanas ietekme

2. Hlora preparātu minimālā efektīvā koncentrācija

Dezinficējošiem līdzekļiem uz hlora bāzes ir spēcīga DNS degradācijas iedarbība, taču to metālu kodīguma un kairinājuma dēļ tos var izmantot grīdas, nemetāla darba virsmu, mērcēšanas uzgaļu, centrifūgas mēģenes un citu testa priekšmetu tīrīšanai.

Saskaņā ar "Jaunajām koronārās pneimonijas epidēmijas dezinfekcijas tehniskajām vadlīnijām": Piesārņojošās vielas (pacientu asinis, izdalījumi un vemšana) pieejams hlors 5g/L-10g/L hloru saturošs dezinfekcijas līdzeklis;grīdām, sienām un priekšmetu virsmām izmanto pieejamo hloru 1g/L Hlora dezinfekcijas līdzeklis: apģērbu, gultasveļu un citus tekstilizstrādājumus vispirms 30 minūtes mērcē hlora dezinfekcijas līdzeklī ar 0,5g/L pieejamo hloru un pēc tam notīra kā parasti.

3. tabula dažādu hlora dezinfekcijas līdzekļa koncentrāciju DNS noņemšanas efekts

Testa rezultāti liecina, ka: ja efektīvā hlora koncentrācija ir lielāka vai vienāda ar 1,2 g/l, hloru saturošais dezinfekcijas līdzeklis var pilnībā noārdīt 100 kopijas/μL plazmīdu, ja to lieto 5 minūtes.Iedarbojoties 10 minūtes, 84 dezinfekcijas līdzeklis ar efektīvo hlora koncentrāciju, kas ir lielāka vai vienāda ar 0,6 g/l, var pilnībā noārdīt 100 kopijas/μL plazmīdu.

3. Gaisa noņemšanas eksperiments, kas piesārņots ar nukleīnskābju aerosolu

Kā attīrīt ar nukleīnskābju aerosoliem piesārņoto gaisu?Lielākā daļa domu ir izveidot ar aerosolu piesārņotu vidi un pēc tam to attīrīt vai attīrīt nukleīnskābes pēc piesārņojuma.Manuprāt, eksperiments, kuru nevar atkārtot un eksperimenta rezultātus nevar kvantitatīvi analizēt, ir bezjēdzīgs, tāpēc es aizņēmos dažas dezinfekcijas gaisa dezinfekcijas metodes.Skatiet sadaļu GB27948-2020 Vispārējās prasības gaisa dezinfekcijas līdzekļiem un Dezinfekcijas tehniskās specifikācijas

1. Pārbaudes materiāli

1.1 DNS noņemšanas līdzeklis: šajā eksperimentā tika atlasīti divi komerciāli pieejami DNS noņēmēji 6 un 8 1. tabulā.

1.2 Testa plazmīda: Ņemot vērā, ka vairumam laboratorijas piesārņojuma CT vērtība būs lielāka par 30, šoreiz izmantotā ASFV gēna plazmīda koncentrācija ir aptuveni 100 kopijas/μL, un fluorescējošā kvantitatīvā PCR CT ir aptuveni 31.07.Pievienojiet plazmīdu floking vates tamponam un izžāvējiet.

1.3 Testa instruments: Bilingkehan KVBOX dezinfekcijas instrumentam, ko laipni atbalsta Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ir lieliska gaisa dezinfekcijas veiktspēja ar ūdeņraža peroksīda dezinfekcijas līdzekli, un tas var efektīvi iznīcināt sporas un citus mikroorganismus.

1.4 Testa telpa: slēgts pārsūtīšanas logs apmēram 0,1 kubikmetru.

2. Pārbaudes metode

Dezinfekcijas aparātā iestatītais dezinfekcijas līdzekļa daudzums ir 10 ml, un koncentrācija ir 100 ml/m3, kas ir daudz lielāka nekā "GB27948-2020 Vispārējās prasības gaisa dezinfekcijas līdzekļiem": izmantojot aerosola izsmidzināšanas dezinfekciju, dezinfekcijas līdzekļa daudzumam jābūt ≤10 ml/m3.