Problēmu analīzes rokasgrāmata

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Zema raža vai bez DNS

Parasti ir daudzi faktori, kas ietekmē genoma DNS iznākumu, tostarp parauga avots, parauga vecums, parauga uzglabāšanas apstākļi un darbība.

Ekstrakcijas laikā nevarēja iegūt genoma DNS

1. Audu paraugi tiek nepareizi uzglabāti vai glabāti pārāk ilgi, kā rezultātā notiek genoma DNS degradācija.

Ieteikums: Uzglabājiet audu paraugus šķidrā slāpeklī vai -20°C;mēģināt izmantot tikko savāktos paraugus genoma DNS ekstrakcijai.

2. Pārāk mazs parauga daudzums var izraisīt attiecīgās genoma DNS neizdalīšanu.

Ieteikums: audu paraugiem, kas ir ilgstoši uzglabāti vai kuriem ir smaga genoma DNS degradācija, audu paraugu daudzumu var atbilstoši palielināt, lai iegūtu ievērojamu genoma DNS.Parauga daudzumu var noteikt atbilstoši DNS vajadzībām, taču svaigā parauga daudzums nedrīkst pārsniegt 100 mg, bet sausais paraugs nedrīkst pārsniegt 30 mg.

3. Paraugs nav samalts ar šķidro slāpekli vai novietots pārāk ilgi pēc šķidrā slāpekļa.

Ieteikums: DNS ekstrakcijas laikā paraugs pilnībā jāsasmalcina ar šķidro slāpekli, lai salauztu šūnas sieniņu;pēc slīpēšanas, lūdzu, pārnesiet parauga pulveri uz PL1, kas iepriekš uzkarsēts līdz 65 grādiem°C pēc iespējas ātrāk (kad maltais pulveris ir izkusis, genoma DNS sāks strauji noārdīties).

4. Nepareiza Foregene Protease uzglabāšana izraisa samazinātu vai inaktivētu aktivitāti.

Ieteikums: apstipriniet Foregene Protease uzglabāšanas nosacījumus vai nomainiet to ar jaunu Foregene Protease fermentatīvai hidrolīzei.

5. Komplekts ir nepareizi glabāts vai glabāts pārāk ilgi, izraisot dažu komplekta sastāvdaļu atteici.

Ieteikums: iegādājieties jaunu augu genoma DNS ekstrakcijas komplektu saistītajām operācijām.

6. Nepareiza komplekta lietošana.

Ieteikums: iegādājieties augu DNS izolācijas komplektu, kas paredzēts paraugiem augu genoma DNS ekstrakcijai un attīrīšanai.

7. Bufera WB, nepievienojot abezūdens etanols.

Ieteikums: pārliecinieties, ka buferšķīdumam WB ir pievienots pareizais absolūtā etanola daudzums.

8. Eluents netika pareizi pilēts uz silīcija dioksīda membrānas.

Ieteikums: pievienojiet iepriekš uzkarsētu eluentu līdz 65 grādiem℃pa pilienam līdz silikagela membrānas vidum un atstājiet to istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.

Ekstrakcija, lai iegūtu zemas ražības genoma DNS

1. Paraugs tiek nepareizi uzglabāts vai glabāts pārāk ilgi, kā rezultātā notiek genoma DNS degradācija.

Ieteikums: uzglabāt audu paraugus -20℃;mēģināt izmantot tikko savāktos audu paraugus genoma DNS ekstrakcijai.

2. Ja audu paraugu daudzums ir pārāk mazs, iegūtā genoma DNS būs mazāka.

Ieteikums: Daži augu paraugi ir bagāti ar ūdeni, piemēram, ūdensaugi, piemēram, aļģes utt., devu var atbilstoši palielināt vai ūdeni var nedaudz dehidrēt pirms operācijas.

3. Paraugi nebija rūpīgi samalti ar šķidro slāpekli vai pēc malšanas tika atstāti istabas temperatūrā pārāk ilgi.

Ieteikums: Šķidrā slāpekļa malšanai jābūt pietiekamai, un parauga šūnas sieniņai jābūt pēc iespējas vairāk salauztai;tūlīt pēc slīpēšanas parauga pulveris jāpārnes uz 65℃uzkarsēts buferis PL1 nākamajai darbībai.

4. Neizmantojiet pareizo komplektu.

Ieteikums: izmantojiet īpašu augu DNS izolācijas komplektu, lai ekstrahētu un attīrītu augu genoma DNS.

5. Nepareiza Foregene Protease uzglabāšana izraisa samazinātu vai inaktivētu aktivitāti.

Ieteikums: apstipriniet Foregene Protease uzglabāšanas nosacījumus vai nomainiet to ar jaunu Foregene Protease fermentatīvai hidrolīzei.

6. Eluenta problēma

Ieteikums: lūdzu, izmantojiet buferšķīdumu EB eluēšanai;ja izmanto ddH₂O vai citiem eluentiem pārliecinieties, vai eluenta pH ir no 7,0 līdz 8,5.

7. Eluents nav pareizi pilēts

Ieteikums: lūdzu, pievienojiet eluēšanas pilienu silīcija dioksīda membrānas vidum un atstājiet to istabas temperatūrā 5 minūtes, lai palielinātu eluēšanas efektivitāti.

8. Eluenta tilpums ir pārāk mazs

Ieteikums: genoma DNS eluēšanai izmantojiet eluentu saskaņā ar instrukcijām, vismaz ne mazāk kā 100μl.

Ekstrahēta genoma DNS ar zemu tīrības pakāpi

Zemā genoma DNS tīrība novedīs pie pakārtoto eksperimentu neveiksmes vai vājas ietekmes, piemēram: fermentu nevar sagriezt un mērķa gēna fragmentu nevar iegūt ar PCR.

1. Dažādi proteīnu piesārņojumi, RNS piesārņojums.

Analīze: kolonnas mazgāšanai neizmantoja buferšķīdumu PW;Buferšķīdums PW netika izmantots kolonnas mazgāšanai ar pareizo centrifugēšanas ātrumu.

Ieteikums: mēģiniet nodrošināt, lai supernatantā nebūtu nokrišņu, kad supernatants tiek izvadīts caur kolonnu;noteikti nomazgājiet attīrīšanas kolonnu ar buferšķīdumu PW saskaņā ar instrukcijām, un šo darbību nevar izlaist.

2. Piemaisījumu jonu piesārņojums.

Analīze: Bufera WB mazgāšanas kolonna tika izlaista vai mazgāta tikai vienu reizi, kā rezultātā radās atlikušais jonu piesārņojums.

Ieteikums: Noteikti mazgājiet divas reizes ar Buffer WB saskaņā ar instrukcijām, lai pēc iespējas vairāk noņemtu atlikušos jonus.

3. RNāzes piesārņojums.

Analīze: Buferim pievieno eksogēnu RNāzi;nepareiza mazgāšanas darbība buferšķīdumā PW radīs atlikušo RNāzi un ietekmēs pakārtotās RNS eksperimentālās darbības, piemēram, in vitro transkripciju.

Ieteikums: Foregene sērijas nukleīnskābju ekstrakcijas komplekti var noņemt RNS bez papildu RNāzes, un visiem augu DNS izolācijas komplekta reaģentiem nav nepieciešama RNāze;noteikti nomazgājiet attīrīšanas kolonnu ar buferšķīdumu PW saskaņā ar instrukcijām, un šo darbību nevar izlaist.

4. Etanola atlikumi.

Analīze: Pēc attīrīšanas kolonnas mazgāšanas ar buferšķīdumu WB netika veikta tukšas caurules centrifugēšana.

Ieteikums: Izpildiet norādījumus par pareizu tukšas mēģenes centrifugēšanu.

Instrukcijas:

Augu DNS izolācijas komplekta lietošanas instrukcija