Augu kopējā RNS izolācijas komplekts Plus kopējais RNS attīrīšanas komplekts augiem, kas bagāti ar polisaharīdiem un polifenoliem
Komplekta apraksts:
Kat.Nr.RE-05021/05022/05024
Kopējās RNS attīrīšanai no vispārējiem augu paraugiem, kas satur daudz polisaharīdu un polifenolu komponentus.
Ātri ekstrahējiet augstas kvalitātes kopējo RNS no augu paraugiem ar augstu polisaharīdu un polifenolu saturu.
Bez RNāzes, izmantojot DNS tīrīšanas kolonnu
Vienkārši — visas darbības tiek veiktas istabas temperatūrā
Ātri — darbību var pabeigt 30 minūtēs
Drošs — netiek izmantots organiskais reaģents 
Specifikācijas
50 sagatavošanās, 200 sagatavošanās
Komplektā tiek izmantota Foregene izstrādātā vērpšanas kolonna un formula, kas var efektīvi iegūt augstas tīrības un augstas kvalitātes kopējo RNS no dažādiem augu audiem ar augstu polisaharīdu vai polifenolu saturu.Tas nodrošina DNS tīrīšanas kolonnu, kas var viegli noņemt genoma DNS no supernatanta un audu lizāta.Tikai RNS kolonna var efektīvi saistīt RNS.Komplekts vienlaikus var apstrādāt lielu skaitu paraugu.
Visa sistēma nesatur RNāzi, tāpēc attīrītā RNS netiks noārdīta.Buferis PRW1 un buferis PRW2 var nodrošināt, ka iegūtā RNS nav piesārņota ar olbaltumvielām, DNS, joniem un organiskiem savienojumiem.
Komplekta sastāvdaļas
| Buferis PSL1, buferis PS, buferis PSL2 |
| Buferis PRW1, buferis PRW2 |
| RNāzes nesaturošs ddH2O, DNS tīrīšanas kolonna |
| Tikai RNS kolonna |
Īpašības un priekšrocības
■ Darbība istabas temperatūrā (15-25 ℃) visa procesa laikā, bez ledus vannas un zemas temperatūras centrifugēšanas.
■ Pilnīgs komplekts bez RNāzes, nav jāuztraucas par RNS degradāciju.
■ Īpaši piemērots RNS attīrīšanai no polisaharīdu un polifenolu augu paraugiem.
■ DNS tīrīšanas kolonna īpaši saistās ar DNS, lai komplekts varētu noņemt genoma DNS piesārņojumu, nepievienojot DNāzi.
■ Augsts RNS iznākums: tikai RNS saturoša kolonna un unikāla formula var efektīvi attīrīt RNS.
■ Ātrs ātrums: viegli darbināms, un to var pabeigt 30 minūšu laikā.
■ Drošība: nav nepieciešams organiskais reaģents.
■ Augsta kvalitāte: attīrītie RNS fragmenti ir augstas tīrības pakāpes, nesatur olbaltumvielas un citus piemaisījumus, un tos var izmantot dažādiem pakārtotiem eksperimentāliem lietojumiem.
Produkta parametri
■ Pakārtotie pielietojumi: pirmās virknes cDNS sintēze, RT-PCR, molekulārā klonēšana, Northern Blot u.c.
■ Paraugs: polisaharīdu un polifenolu svaigi vai saldēti augu audi
■ Devas: 50 mg augu audu
■ Maksimālā attīrīšanas kolonnas RNS saistīšanās spēja: 80 μg
■ Elucijas tilpums: 50-200 μl
Komplekta pielietojums
Tas ir piemērots kopējās RNS ekstrakcijai un attīrīšanai no svaigiem vai saldētiem augu audu paraugiem (īpaši svaigiem augu lapu audiem) ar augstu polisaharīdu un polifenolu saturu.
Darba plūsma
Diagramma
Plant Total RNA Isolation Kit Plus apstrādāja 50 mg svaigu polisaharīdu un polifenolu lapu, un 5% attīrītas RNS tika pārbaudītas ar elektroforēzi.
1: banāns
2: Ginkgo
3: kokvilna
4: Granātābols
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Šo komplektu var uzglabāt 24 mēnešus sausos apstākļos istabas temperatūrā (15-25℃);ja nepieciešams uzglabāt ilgāku laiku, var glabāt 2–8℃ temperatūrā.
Buferi PSL1 var ievietot 4℃ temperatūrā 1 mēnesi pēc β-merkaptoetanola pievienošanas (ieteicams pievienot eksperimenta laikā).
Kolonna aizsērējusi
Pēc kolonnas aizsprostošanās RNS iznākums ir samazināts vai pat neiespējams RNS attīrīt, un iegūtā RNS masa ir maza.
Bieža cēloņa analīze:
1. Paraugu pārtraukumi nav pamatīgi.
Parauga lūzums pilnībā neizraisa DNS TĪRĪŠANAS KOLONNA bloķēšanu, vienlaikus ietekmējot RNS iznākumu un kvalitāti.Mēs iesakām veikt ātru slīpēšanu pietiekamā daudzumā šķidrā slāpeklī, kad salauzāt paraugus. Mēģiniet sasmalcināt parauga šūnas sieniņu, šūnu membrānu un citus audus.Poliola polisaharīdu augu paraugiem mēs iesakām izmantot Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Nosūcot atdalītā parauga supernatantu ar DNS tīrīšanas kolonnu, iespējams, ka šūnu fragmentētās nogulsnes var tikt ieelpotas.
Ņemtie šūnu fragmentētie nogulumi radīs kolonnu TIKAI RNS, kas tiks bloķēta, kad tiks veikta RNS adsorbcijas darbība (skatiet 6. darbību).Mēs iesakām rūpīgi nosūkt šo supernatantu, lai izvairītos no šūnu atlieku iesūkšanas.
3. Parauga sākotnējā summa ir pārāk liela.
Pārmērīga parauga izmantošana izraisīs nepilnīgu parauga fragmentāciju vai nepilnīgu šūnu līzi ar buferšķīdumu PSL1, kā rezultātā attīrīšanas laikā tiks bloķēta attīrīšanas kolonna.Augu kopējās RNS izolācijas komplekts Katrs atsevišķais attīrītais darbības paraugs ir 50 mg.Poliola polisaharīdu augu paraugiem iesakām izmēģināt Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Centrifūgas temperatūra ir pārāk zema.
Viss RNS izolācijas un attīrīšanas process tiek veikts istabas temperatūrā (20-25°C), izņemot to, ka parauga audus sadala šķidrais slāpeklis. Dažu kriogēno centrifūgu temperatūra ir zemāka par 20℃, kas var izraisīt DNS tīrīšanas kolonnas un/vai tikai RNS kolonnas bloķēšanu.Ja tā notiek, iestatiet centrifūgas temperatūru uz 20-25℃, unpārliecinieties, vai līzes maisījums un/vai supernatants, kam pievienots etanols, ir iepriekš uzkarsēts līdz 37°C.
RNS netiek ekstrahēts vai RNS iznākums ir zems
Parasti ir daudz faktoru, kas ietekmē reģenerācijas efektivitāti, piemēram: parauga RNS saturs, darbības metode, eluēšanas tilpums utt.
Biežāko cēloņu analīze, kā norādīts tālāk:
1.Operācijas laikā tika veikta ledus vanna vai zemas temperatūras (4°C) centrifugēšana.
Ieteikums: Darbiniet istabas temperatūrā (15-25°C) visā procesā neveiciet ledus vannu un centrifugēšanu zemā temperatūrā.
2.RNS ir degradējusies nepareizas parauga saglabāšanas vai ilgstošas parauga saglabāšanas dēļ.
Ieteikums: Svaigi savāktos paraugus ātri jāsasaldē šķidrā slāpeklī un pēc tam ilgstoši jāuzglabā -80°C, jāizvairās no atkārtotas paraugu sasaldēšanas un atkausēšanas;vai nekavējoties iemērc paraugus RNS stabilizatora RNAlater šķīdumā (dzīvnieku paraugi).
3. Nepietiekama parauga sadrumstalotība un līze izraisa attīrīšanas kolonnas bloķēšanu.
Ieteikums: Sasmalcinot salveti, lūdzu, pārliecinieties, vai audi ir pietiekami samalti, un ātri pārnesiet to uz iepriekš sagatavotu buferšķīdumu PSL1 (apstipriniet, ka ir pievienota pareizā β-ME proporcija, skatiet procedūras 1. darbību).
4.Eluents tika pievienots nepareizi.
Ieteikums: Pārliecinieties, ka RNase-Free ddH2O ir pilināts attīrīšanas kolonnas membrānas vidū.
5. Buferim PSL2 vai buferim PRW2 netika pievienots pareizais absolūtā etanola daudzums.
Ieteikums: lūdzu, ievērojiet norādījumus, pievienojiet pareizo absolūtā etanola daudzumu buferšķīdumam PSL2 un buferšķīdumam PRW2 un labi samaisiet pirms komplekta lietošanas.
6.Audu parauga daudzums nav piemērots.
Ieteikums: izmantojiet 50 mg audu uz 500 μl buferšķīduma PSL1.Lietojot pārāk daudz audu, samazināsies iegūtās RNS daudzums, kā arī samazināsies iegūtās RNS tīrība.Mēs stingri iesakām, ka sākotnējā parauga deva nedrīkst pārsniegt 50 mg vienā RNS ekstrakcijas operācijā.
7.Nepiemērots eluēšanas tilpums vai nepilnīga eluēšana.
Ieteikums: Attīrīšanas kolonnas eluenta tilpums ir 50-200 μl;ja eluēšanas efekts nav apmierinošs, ieteicams pagarināt laiku istabas temperatūrā pēc iepriekš uzkarsēta RNase-Free ddH2O pievienošanas, piemēram, 5-10 min.
8. Attīrīšanas kolonnā ir etanola atlikumi pēc mazgāšanas ar BufferPRW2.
Ieteikums: ja tukšo mēģeni centrifugē 1 minūti un pēc mazgāšanas buferšķīdumā PRW2 joprojām ir palicis etanols, varat palielināt tukšās mēģenes centrifugēšanas laiku līdz 2 minūtēm vai novietot attīrīšanas kolonnu istabas temperatūrā uz 5 minūtēm, lai pilnībā noņemtu atlikušo etanolu.
9. Komplekts tika izmantots nepareizi.
Ieteikums: polifenola polisaharīdu augu paraugiem, izmantojot tādus izplatītus komplektus kā Plant Total RNA Isolation Kit, iespējams, nevarēs iegūt ideālus RNS paraugus.Mēs iesakām izmantot Plant Total RNA IsolationKit Plus, kas ir īpaši izstrādāts polifenola polisaharīdu augu paraugiem.Komplekts, kas īpaši izstrādāts RNS ekstrakcijai no polifenola un polisaharīdu augu paraugiem.
OD260/OD280 vērtība ir zema
RNS eluēšana ar ddH2O un izmantota spektrofotometra rādījumiem rada zemas OD260/OD280 vērtības.Mēs iesakām izmantot 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (nevis RNāzes nesaturošu ddH2O, lai eluētu RNS), lai iegūtu salīdzinoši pareizas OD260/OD280 vērtības, skatiet “RNS koncentrācijas un attīrīšanas testi” 19. lpp.
Attīrītā RNS tiek noārdīta
Attīrītas RNS kvalitāte ir saistīta ar tādiem faktoriem kā parauga saglabāšana, RNāzes piesārņojums un manipulācijas.
Bieži sastopamo cēloņu analīze:
1.Audu paraugi pēc savākšanas netika laikus uzglabāti.
Ieteikums: Ja audu paraugus pēc savākšanas neizmanto laikus, lūdzu, nekavējoties uzglabājiet tos šķidrā slāpeklī zemā temperatūrā vai pārnesiet uz -80°C ilgstošai uzglabāšanai pēc ātras sasaldēšanas šķidrā slāpeklī, vai nekavējoties iegremdējiet paraugus RNS stabilizatora RNAlater šķīdumā (dzīvnieku paraugi).RNS ekstrakcijai mēģiniet izmantot svaigi savāktus audu paraugus.
2.Audu paraugu atkārtota sasaldēšana un atkausēšana.
Ieteikums: Uzglabājot audu paraugus, vislabāk tos sagriezt nelielos gabaliņos konservēšanai un daļu no tiem izņemt, lietojot tos, lai izvairītos no RNS degradācijas, ko izraisa atkārtota paraugu sasaldēšana un atkausēšana.
3.RNase tiek ieviesta operāciju zālē vai nav valkāti vienreizējie cimdi, maskas utt.
Ieteikums: RNS ekstrakcijas eksperimentus vislabāk veikt atsevišķās RNS operācijās, un laboratorijas galds pirms eksperimenta ir jānotīra, kā arī eksperimenta laikā jāvalkā vienreizējās lietošanas cimdi un maskas, lai izvairītos no RNS degradācijas, ko izraisa RNāzes ievadīšana vislielākajā mērā.
4. Lietošanas laikā reaģents ir piesārņots ar RNāzi.
Ieteikums: nomainiet ar jaunu augu kopējās RNS ekstrakcijas komplektu sēriju saistītiem eksperimentiem.
5. Centrifūgas mēģenes un pipetes uzgaļi, ko izmanto RNS manipulācijām, ir piesārņoti ar RNāzi.
Ieteikums: Pārliecinieties, vai RNS ekstrakcijā izmantotās centrifūgas mēģenes, pipešu uzgaļi, pipetes utt. ir bez RNāzes.
Lietošanas rokasgrāmatas:
Augu kopējā RNS izolācijas komplekts Plus lietošanas instrukcija
