QuickEasyᵀᴹ Reāllaika PCR komplekts-Taqman
Apraksti
2× QuickEasyTMĪsts PCR Mix-Taqman, ko nodrošina QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman komplekts ir jaunas paaudzes galvenā maisījuma sistēma, kas paredzēta reāllaika PCR pastiprināšanas reakcijai, izmantojot īpašas fluorescējošas zondes.Tās galvenā Foregene HS Taq DNS polimerāze ir balstīta uz antivielu modifikāciju, ko izmanto kopā ar Foregene tālāk optimizētu PCR sistēmu, tai ir augstāka specifika un amplifikācijas efektivitāte.Salīdzinot ar parasto PCR maisījumu, tam ir spēcīgāka pastiprināšanas spēja un zemāks neatbilstības līmenis.To var izmantot fluorescences kvantitatīvajā PCR reakcijā, lai samazinātu nespecifisko amplifikāciju un uzlabotu PCR precizitāti.Tas var ievērojami uzlabot produkta specifiku un reakcijas jutīgumu.Tajā pašā laikā ROX tika nodrošināts kā iekšējā atsauces krāsviela.
QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman komplektam ir plašs pielietojums veidnes daudzumam, un tas var iegūt labu standarta līkni dažādos kvantitatīvos reģionos, kā arī var precīzi noteikt un noteikt mērķa gēnus ar labu atkārtojamību un augstu ticamību.
Specifikācijas
200 sagatavošanās darbi,500 sagatavošanās darbi,1000 sagatavošanās darbi,2000 Sagatavošanās
Komplekta sastāvdaļas
QuickEasyTMReālā laika PCR komplekts-Taqman(20μlsistēma) | ||||
Komplekta saturs | QP-01121 | QP-01122 | QP-01123 | QP-01124 |
200 sagatavošanās darbi | 500 sagatavošanās darbi | 1000 sagatavošanās darbi | 2000 Sagatavošanās | |
2×ĀtriViegliTM Īsta PCR Sajauc-Takmans | 1 ml×2 | 1,7 ml×3 | 1,7 ml×6 | 1,7 ml×12 |
20×ROX atsauces krāsa | 200μL | 0,5 ml | 1 ml | 1 ml×2 |
DNāzi nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 1,7 ml×2 | 10 ml | 20 ml |
IFU | 1gabals | 1gabals | 1gabals | 1gabals |
Īpašības un priekšrocības
■ Unikālā PCR optimizācijas sistēma padara 2 × QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman ir vairāk saderīgs.
■ Karstās palaišanas Foregene HS Taq Polymerase ir augstāka pastiprināšanas efektivitāte, augstāka pastiprināšanas jutība un augstāka pastiprināšanas specifika.
■ 2× QuickEasyTM Real PCR Mix -Taqman izmanto unikālu sistēmu, ko optimizējusi Foregene, lai uzlabotu sekvences specifiskās zondes noteikšanas jutīgumu un specifiskumu, ko var izmantot genotipa noteikšanai un kopiju skaita variāciju noteikšanai un iegūt precīzus rezultātus.
■ Šim produktam ir ROX iekšējā atsauces krāsa, ko var izmantot, lai novērstu signāla fona un signāla kļūdu starp iedobēm, ko klientiem ir ērti izmantot dažāda veida kvantitatīvos PCR instrumentos.
Komplekta pielietojums
■ Fluorescences kvantitatīvā PCR veidnes kvantitatīvās analīzes veikšanai;
■ Ctradicionālā PCR amplifikācija;
■ Var izmantot alēļu noteikšanai.
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Komplekts jāuzglabā -20°C tumsā;ja to lieto bieži, to var arī īsu laiku uzglabāt 4°C (izlietot 10 dienu laikā).
Reālā laika PCR primer dizaina principi
Forward Primer un Reverse Primer
Reāllaika PCR gadījumā primer dizains ir ļoti svarīgs.Praimeri ir saistīti ar PCR amplifikācijas specifiku un efektivitāti, un tos var veidot, pamatojoties uz šādiem principiem:
Primer garums: 18-30bp.
GC saturs: 40-60%.
Tm vērtība: Primer projektēšanas programmatūra, piemēram, Primer 5, var norādīt gruntskrāsas Tm vērtību.Augšējā un lejtecē esošo primeru Tm vērtībām jābūt pēc iespējas tuvākām.Var izmantot arī Tm aprēķina formulu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Veicot PCR, par atkausēšanas temperatūru parasti tiek izvēlēta temperatūra, kas ir zemāka par primera Tm vērtību 5 °C (atbilstošs atkausēšanas temperatūras paaugstinājums var palielināt PCR reakcijas specifiku).
Primeri un PCR produkti:
Dizaina primer PCR amplifikācijas produkta garums ir vēlams 100-150 bp.
Pēc iespējas jāizvairās no dizaina gruntēšanas veidnes sekundārajā strukturālajā zonā.
Izvairieties no 2 vai vairāk komplementāru bāzu veidošanās starp augšpus un lejpus esošajiem gruntskrāsām 3′ galiem.
Primer 3′ spailes pamatne nevar būt ar 3 papildu secīgiem G vai C.
Pašiem praimeriem nevar būt komplementāras struktūras, pretējā gadījumā veidosies matadata struktūra, kas ietekmēs PCR amplifikāciju.
ATCG ir jāsadala pēc iespējas vienmērīgāk primeru secībā, un jāizvairās no 3′ gala bāzes kā T.
1. pielikums: Cell Direct RT-qPCR komplekta komponentu papildpakete
1.Šūnu līzes šķīdums
| |||
Komplekta sastāvdaļas (24 bedrīšu līzes sistēma / iedobe) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
daļaes | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
daļaII | DNS dzēšgumija | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
| |
Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5 × tiešā RT sajaukšana | 800 μl |
RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| ||
Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
50× ROX atsauces krāsa | 40 μl | 200 μl |
RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |