Ievads:

RNS, zinātniskais nosaukums ribonukleīnskābe, tās saīsinājums nāk no RiboNucleic Acid, ir nukleīnskābes veids, kas veidojas, savienojot vismaz desmitiem ribonukleotīdu caur fosfodiestera saitēm.

RNS izpētes priekšnoteikums ir iegūt kopējo RNS bez piesārņojuma, un RNS ekstrakcijas pamatprincipu var aptuveni apkopot šādi:

1. Vispirms izjauciet šūnas

2. Pēc tam noņemiet makromolekulāros piemaisījumus (olbaltumvielas, lipīdus, DNS utt.)

3. Visbeidzot, RNS tiek izgulsnēts, vienlaikus atdalot sāļus un organiskos šķīdinātājus un tālāk attīrot RNS.

Ekstrakcijas metodes pagātne un tagadne

Pirmās paaudzes RNS ekstrakcijas metode ir TRIzol izgulsnēšanas metode (izmantotie reaģenti ir guanidīna izotiocianāts, fenols, hloroforms utt.), ko izgudroja vectēvs Pjotrs Čomčinskis un vecmāmiņa Nikoleta Saki, jo šis izgudrojums ļauj iegūt RNS Ātri un vienkārši, kopš tā laika sākās RNS izpētes uzplaukums.

Vēlāk vectēvs pārdeva šo patentu uzņēmumam Invitrogen, un Invitrogen popularizēja šo metodi pasaulē un kļuva par plaši izmantotu metodi.

Vēlāk Invitrogen iegādājās Thermo!

Reprezentatīvais produkts: Invitrogen's TRIzol reaģents

Tomēr TRIzol izgulsnēšanas metodei ir nepieciešama RNS daudzkārtēja izgulsnēšana un ekstrakcija, un izmantotie reaģenti ir toksiski, un to darbībai ir nepieciešams ilgs laiks.

Tāpēc tika izveidota otrās paaudzes kolonnas-enzīmu attīrīšanas metode, izmantojot silikagela membrānu kā specifisku nukleīnskābju adsorbcijas materiālu, lai maksimāli palielinātu RNS atgūšanu paraugā, vienlaikus noņemot citus piemaisījumus.

Otrās paaudzes metode vienkāršo darbību, pamatojoties uz stabilu veiktspēju, samazina riska faktoru un uzlabo RNS ekstrakcijas efektivitāti.

Reprezentatīvie produkti: QIAGEN RNeasy un lielākā daļa vietējo produktu

Tomēr gan pirmās, gan otrās paaudzes metodēm ir nepieciešams izmantot DNāzi, lai noņemtu DNS piesārņojumu, kas rada zināmas neērtības turpmākajos pakārtotajos eksperimentos.Atlikusī DNāze samazinās reversās transkripcijas efektivitāti un samazina pirmās virknes cDNS sintēzi, tādējādi ietekmējot rezultātu precizitāti.

Tāpēc trešās paaudzes ekstrakcijas metode ir optimizēta, pamatojoties uz otro paaudzi.Eksperimentam nav jāpievieno nekādi fermenti, un RNS var viegli iegūt tikai ar divām kolonnām.

1. kolonna: DNS tīrīšanas kolonna DNS notīrīšanai

2. kolonna: tikai RNS Kolonna īpaši adsorbē un atgūst RNS

Šāda vienkārša darbība ne tikai ietaupa laiku, bet arī atvieglo pakārtoto eksperimentu darbību!

Reprezentatīvie produkti: QIAGEN RNeasy Plus unForegeneRNS attīrīšanas sērijas produkti

(RNeasy Plus)

(Foregene'sAugu kopējās RNS izolācijas komplekts）

Pastāsti klusi!Foregene RNS komplektā ir arī īpaši ērti lietojams RNase Eraser, kas var pilnībā noņemt 400 μg RNāzes uz cietās virsmas 1 minūtē, nepievienojot cilvēka ķermenim toksiskas vielas!

Attēls1: darbības procesu salīdzināšanas diagramma

Foregene produkti var pabeigt RNS ekstrakciju tikai divās dziesmās, neradiet citus greizsirdīgus par jūsu eksperimenta gaitu!

Attēls2:Experimentālie rezultāti salīdzināšanas diagramma

Pirmā paaudze (1: TRIzol)

Otrā paaudze (2: QIAGEN RNeasy)

Trešā paaudze (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Attēls3: qPCR grafiks (amplifikācijas līknes grafiks)

Pirmā paaudze (zaļš nozīmē TRIzol -, sarkans nozīmē TRIzol +)

Otrā paaudze (debeszils nozīmē QIAGEN RNeasy-, sarkans nozīmē QIAGEN RNeasy +)

Trešā paaudze (zils nozīmē QIAGEN RNeasy plus, zaļš nozīmē Foregene)

(Piezīme: qPCR grafiks "-" norāda, ka DNāze nav pievienota un DNS piesārņojums nav noņemts. Tāpēc CT ir augstāks un rezultāts nav precīzs; "+" norāda, ka DNāze ir pievienota un DNS piesārņojums ir noņemts, rezultāts ir precīzs)

Katrs tehniskais jauninājums nozīmē, ka eksperimenta darbība attīstās vienkāršākā un lietotājam draudzīgākā virzienā.

Foregene mērķis ir palīdzēt lielākam skaitam zinātnisko pētnieku ietaupīt eksperimentu laiku un izmaksas, iegūt augstas kvalitātes eksperimentālos rezultātus un kopīgi radīt vērtīgākus zinātniskās pētniecības sasniegumus.