SOP sistēmas izveide

Izveidojiet PCR eksperimenta SOP, lai standartizētu eksperimenta personāla uzvedību.

Eksperimenta veicēji stingri ievēro darbības procedūras un samazina PCR piesārņojumu, ko var izraisīt cilvēka faktori, vai novērš piesārņojuma rašanos darbībā.Turklāt eksperimentētājam jābūt atbilstošām profesionālajām zināšanām un prasmēm, tai skaitā prasmēm darbināt saistīto iekārtu, noskaidrot visu darba procesu, apgūt piesārņojuma apstrādes metodes un laboratorijas kvalitātes kontroles metodes, kā arī pareizi interpretēt testa rezultātus.

Ēkas standarta PCR laboratorija

PCR laboratorija principā ir sadalīta četrās jomās, proti, reaģentu sagatavošanas zonā, paraugu apstrādes zonā, amplifikācijas zonā un amplifikācijas produktu analīzes zonā.Pirmie divi apgabali ir pirmspastiprināšanas zonas, bet pēdējie divi apgabali ir apgabali pēc pastiprināšanas.Pirmspastiprināšanas zona un pēcpastiprināšanas zona ir stingri jānodala.Eksperimentālie materiāli, reaģenti, ierakstīšanas papīrs, pildspalvas, tīrīšanas materiāli utt. var plūst tikai no pirmspastiprināšanas zonas uz pēcpastiprināšanas zonu, tas ir, no reaģenta sagatavošanas zonas, parauga apstrādes zonas, pastiprināšanas zonas un amplifikācijas produkta analīzes zonas, un tie nedrīkst plūst pretējā virzienā.Gaisa plūsmai laboratorijā jāplūst arī no pirmspastiprināšanas zonas uz pēcpastiprināšanas zonu, nevis pretējā virzienā.

Samaziniet eksperimentālos soļus

Ja laboratorija veic tikai PCR noteikšanu un identifikāciju, ieteicams izmantot fluorescējošu kvantitatīvo PCR, nevis parasto PCR.

Fluorescences kvantitatīvās PCR noteikšanas rezultātus var savākt un analizēt ar fluorescējošiem signāliem, tāpēc pēc reakcijas nav nepieciešams atvērt vāku elektroforēzei, kas ļauj izvairīties no PCR produktu piesārņošanas, ko izraisa reakcijas produktu noplūde, veidojot aerosolus.Ja palielināsiet vāciņu atvērumu skaitu gēla elektroforēzes iekraušanas posmā, iespējams, radīsies aerosola piesārņojums.Ieteicams veicināt kvantitatīvās PCR piemērošanu un pakāpeniski aizstāt kvalitatīvo PCR.

Pieņemt UNG pretpiesārņojuma sistēmu

PCR reakcijai tiek izmantota UNG anti-PCR produktu piesārņojuma sistēma.

Sistēma izmanto dUTP, nevis dTTP.Pēc PCR reakcijas visi PCR produkti (DNS fragmenti) tiek iekļauti dUTP;nākamajā PCR reakcijas kārtā sistēmai pievienoto UNG enzīmu inkubē 37°C temperatūrā 5 minūtes pirms PCR, kas var būt specifisks Degradējiet visus DNS fragmentus, kas satur dUTP, un pēc tam veiciet PCR reakciju.Tas var pilnībā novērst PCR produktu izraisīto aerosola piesārņojumu.Efekts ir parādīts zemāk esošajā attēlā:

Piezīme: tiešai PCR sērijai varat izvēlēties FJ Biotech anti-PCR produktu piesārņojuma sistēmas sērijas produktus.

Ieteikt

Laboratorijām, kas veic liela mēroga genotipu testēšanu, papildus saprātīgu laboratoriju izveidei ir ļoti ieteicams reaģentu testēšanai izmantot UNG anti-PCR produktu piesārņojuma sistēmu.

Atgādinājums: šīs sistēmas izmantošana nevar novērst jau izraisīto PCR produkta piesārņojumu.Tāpēc UNG sistēma ir jāizmanto attiecīgā testa sākumā, un UNG sistēma vienmēr jāizmanto PCR pastiprināšanai, lai novērstu PCR produktu piesārņošanu.Viltus pozitīvs.

Veicot liela mēroga testēšanu, ieteicams izmantot Forge Biotech Direct PCR-UNG sistēmu, piemēram: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR komplekts-UNG；

Animal Tissue Direct PCR komplekts-UNG；

Mouse Tail Direct PCR komplekts-UNG；

Zebra Fish Direct PCR komplekts-UNG.

Šī Foregene komplektu sērija var ne tikai ātri un plašā mērogā veikt PCR noteikšanu, bet arī efektīvi novērst un kontrolēt PCR produktu piesārņojumu.