Karstās palaišanas Taq enzīms tiek plaši izmantots.Salīdzinot ar parasto DNS polimerāzi, karstās palaišanas Taq enzīms var efektīvi izvairīties no nespecifiskas amplifikācijas un primer dimēru veidošanās, kā arī var efektīvi uzlabot mērķa gēna amplifikācijas panākumu līmeni.Īpaši ģenētiskās testēšanas jomā karstās palaišanas Taq enzīms ir identificēts kā obligāts standarts nozarē, un parasto DNS polimerāzi nevajadzētu izmantot.Kā redzams no iepriekš minētā, karstās palaišanas Taq fermenti tiek plaši izmantoti.Pašlaik vietējā tirgū ir daudz karstās palaišanas Taq fermentu zīmolu, taču nav daudz augstas kvalitātes karstās palaišanas Taq enzīmu.Saskaroties ar tik daudziem karstās palaišanas Taq fermentu produktiem, kā mums vajadzētu izvēlēties?

1. Izvēlieties karstās palaišanas Taq enzīmu ar augstu pastiprināšanas efektivitāti

PCR amplifikācijas efektivitāte ir cieši saistīta ar Taq enzīma darbību.Pēc tam, kad ir optimizēta laba Taq enzīmu reakcijas sistēma, amplifikācijas efektivitāte ir virs 95%, un sākotnējā veidnes daudzuma pastiprināšanas diapazons ir plašs.Apmierinošu amplifikāciju var iegūt, ja mērķa gēna saturs ir zems, un nav viegli saindēties, ja veidnes daudzums ir augsts un eksponenciālais amplifikācijas periods ir garš.Taq fermentam ar sliktu veiktspēju, pat ja reakcijas sistēma ir optimizēta vairākas reizes, pastiprināšanas efektivitāte joprojām ir mazāka par 90%, pastiprināšanas līknes “S” forma nav acīmredzama, slīpums ir mazs un līkne ir plakana.Ja veidnes daudzums ir mazs, to nevar pastiprināt, un, ja veidnes daudzums ir liels, pastiprināšanas efekts nav ideāls.Tāpēc DNS polimerāžu izvēle ar augstu amplifikācijas efektivitāti ir ļoti svarīga PCR un qPCR panākumiem.

2. Izvēlieties karstās palaišanas Taq fermentu ar spēcīgu fermentu jaudu

Taq enzīma fermentatīvā jauda ir saistīta ar amplifikācijas efektivitāti.Parasti, jo spēcīgāka ir karstās palaišanas Taq enzīma fermentatīvā jauda, ​​jo ilgāks ir PCR amplifikācijas eksponenciālais augšanas periods, jo tipiskāka ir “S formas” līkne, jo augstāka ir fluorescences signāla vērtība un jo vairāk piemērota multipleksa PCR noteikšanai.Zīmola DNS polimerāzes ar vāju enzīmu jaudu parasti var atbalstīt tikai 2-plex reakcijas.Veicot 3-plex reakcijas, pastiprināšanas līkne ir zema, fluorescences signāla vērtība ir zema un nav tipiskas pastiprināšanas līknes, tāpēc rezultātus ir grūti spriest.

3. Izvēlieties karstās palaišanas Taq fermentu ar augstu jutību

Vispārīgi runājot, DNS polimerāzei ir augsta pastiprināšanas efektivitāte un augsta jutība, taču ir arī pretrunas.Ja amplificējamā parauga mērķa gēna pārpilnība ir zema, ieteicams pārbaudīt Taq enzīma amplifikācijas jutību.Visizplatītākā noteikšanas metode ir mērķa gēna plazmīdas fragmenta 10 vai 5 reizes gradienta atšķaidīšana, PCR noteikšana zemākā atšķaidījumā un karstās palaišanas Taq enzīma atlase ar augstāku noteikšanas jutību.

No iepriekš minētā redzams, ka pētniekiem ir jāizvēlas atbilstoši savām eksperimentālajām prasībām un finansējuma nosacījumiem.Vislabāk ir veikt gradienta atšķaidīšanas amplifikācijas eksperimentu, lai noteiktu karstās palaišanas Taq enzīma pastiprināšanas efektivitāti un jutīgumu.

Foregenes piemērs's Taq DNS polimerāze:

Foreasy HS Taq DNS polimerāze

Apraksts

Foreasy HS Taq DNS polimerāze ir DNS polimerāze, kas ekspresēta Escherichia coli inženierijas baktērijās ar gēnu rekombinācijas tehnoloģiju.Enzīms ir apvienots ar unikālu reakcijas buferi, kas padara produktu ļoti izturīgu un saderīgu, un var tieši izmantot parauga lizātu (Foregene Lysis sistēma) kā paraugu noteikšanas reakcijām.

Pieteikums

Attīrītu veidņu un neattīrītu veidņu kvalitatīva PCR un kvantitatīvā PCR noteikšana.

Kvalitātes kontrole

1. Nav konstatēta eksogēna nukleāzes aktivitāte

2.PCR metode genoma DNS atlikuma noteikšanai bez saimnieka

3. Tas var efektīvi pastiprināt vienas kopijas gēnus cilvēka genomā

4. Uzglabāt istabas temperatūrā nedēļu, bez redzamām aktivitātes izmaiņām

Informācija par produktu: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/