Svins

Gara nekodējoša RNS, lncRNS ir nekodējoša RNS, kuras garums pārsniedz 200 nukleotīdus, parasti no 200 līdz 100 000 nt.lncRNS regulē gēnu ekspresiju epiģenētiskā, transkripcijas un pēctranskripcijas līmenī, kā arī piedalās X hromosomu apklusināšanā, genoma iespiešanā un hromatīna modifikācijā, transkripcijas aktivizēšanā, transkripcijas traucējumos, kodola transportēšanā, šūnu cikla regulēšanā, šūnu diferenciācijas regulēšanā un devas kompensācijas efektos (šobrīd ar devu kompensācijas procesi ir saistīti ar cilvēka slimību profilaksi un daudziem citiem faktoriem). karstajiem punktiem biomedicīnas jomā.

01  LncRNS veidi un īpašības

lncRNS ir sadalīta daudzos veidos atbilstoši dažādiem tās veidošanās avotiem, kā parādīts attēlā iepriekš.Ir šādas īpašības:

1. lncRNS parasti ir garākas, ar dinamisku ekspresiju un dažādām splicēšanas metodēm diferenciācijas laikā
2. Salīdzinot ar kodējošiem gēniem, lncRNS parasti ir zemāks ekspresijas līmenis
3. Lielākajai daļai lncRNS ir acīmredzama laika un telpiskās izteiksmes specifika audu diferenciācijas un attīstības procesā.
4. Ir raksturīgas izpausmes audzējiem un citām slimībām
5. LncRNS subcelulārās atrašanās vietas ir dažādas
6. Secība ir zema saglabāšanās, bet funkcijai ir noteikta saglabāšanās pakāpe utt.

02 Bieži uzdotie jautājumi par LncRNA reverso transkripciju

Sakarā ar zemo lncRNS saturu šūnās, garu garumu un augsta līmeņa struktūru, šādai RNS bieži ir sarežģītas struktūras, piemēram, stumbra cilpas vai matadatas, un RT-qPCR ir pakļauta neveiksmīgas reversās transkripcijas vai zemas efektivitātes problēmām.

03 LncRNS reversās transkripcijas šķīdums

Galvenajā noteikumā RNS vīrusu procesu, kas izmanto savu reverso transkriptāzi, lai sintezētu DNS, izmantojot RNS kā veidni, sauc par reverso transkripciju.RNS vīrusa reversās transkriptāzes izmantošanas procesu cDNS veidnes sintezēšanai in vitro sauc par reverso transkripciju.Galvenie elementi, kas iekļauti reversās transkripcijas sistēmā: RNS veidne, reversā transkriptāze, praimeri un citi komponenti.

1.RNS veidne

RNS veidnes ietekme uz reverso transkripciju atspoguļojas tās struktūrā, tīrībā un integritātē.Jo augstāka ir ekstrahētās RNS tīrība un integritāte, jo augstāka ir reversās transkripcijas efektivitāte un precīzāki turpmākie kvantitatīvie rezultāti.RNS, kas attīrīta ar parasti lietotiem RNS ekstrakcijas reaģentiem, bieži satur spirta un guanidīna sāļu atliekas, kam ir spēcīga inhibējoša iedarbība uz lielāko daļu reversās transkriptāzes.

2.Reversā transkriptāze

Reversajai transkriptāzei ir galvenā ietekme uz visu reversās transkripcijas sistēmu.Lielākajā daļā laboratoriju izmantotajai reversajai transkriptāzei piemērotā temperatūra parasti ir 42°C.Faktiski augsta līmeņa RNS struktūras atvēršanai ir nepieciešama augstāka temperatūra, un prasības reversajai transkriptāzei ir augstākas.

3.Primer

Reversās transkripcijas praimeri ietver gēniem specifiskus primerus, izlases primerus un Oligo dT primerus.Lielākā daļa lncRNS nesatur poliA astes, un ir svarīgi pareizi saskaņot izlases primerus ar Oligo dT.

4.Citas sastāvdaļas

Ņemot vērā to, ka RNS ir īpaši viegli noārdāms, var samazināt komponentu ieviešanu reversās transkripcijas sistēmā, kas var efektīvi novērst RNāzes iekļūšanu un nodrošināt vienmērīgu reversās transkripcijas norisi.

Foregēnsiegūst no RNS veidnes, reverso transkripciju uz qPCR

Visaptveroši pavadiet savu lncRNS noteikšanu

Dzīvnieka kopējā RNS ImierinājumsKomplekts (ar gDNS noņemšanas kolonnu)

Šūnu kopējā RNS ImierinājumsKomplekts (ar gDNS noņemšanas kolonnu)

Lnc-RT HeroTM I (ar gDNāzi) (Super premikss pirmās virknes cDNS sintēzei no lncRNS)

Reāllaika PCR EasyTM-SYBR Green I

Apriekšrocības ofRNS ekstrakcija:

Komplektā tiek izmantota trešās paaudzes RNS ekstrakcijas tehnoloģija, nav nepieciešams izmantot DNāzi.

11 minūtes no 96, 24, 12 un 6 iedobēs kultivētām šūnām, augstas efektivitātes gDNS nesaturošas, augstas tīrības un augstas kvalitātes kopējās šūnu RNS ekstrakcija.

LncRNS reversās transkripcijas priekšrocības:

Reversās transkripcijas sistēma, kas īpaši izstrādāta LncRNS, lai ātri noņemtu genoma DNS piesārņojumu.

Reversās transkripcijas sistēmai ir augsta termiskā stabilitāte, un tai joprojām ir laba reversās transkripcijas veiktspēja 50 °C temperatūrā.

Veidnes ar augstu GC saturu un sarežģītu sekundāro struktūru var apgriezt ar augstu efektivitāti.

Priekšrocībasof qPCR:

Karstās palaišanas Foregene Taq polimerāzei ir augstāka pastiprināšanas efektivitāte, augstāka pastiprināšanas jutība un augstāka pastiprināšanas specifika

Optimizētais Real PCR Easy Mix padara SYBR Green I ar augstāku noteikšanas jutību, un tā fluorescences intensitāte ir 3–5 reizes lielāka nekā līdzīgiem produktiem, kas var apmierināt dažāda veida fluorescences kvantitatīvo eksperimentu vajadzības.