Pipešu uzgaļu un EP tūbiņu sterilizācija u.c.

1. Sagatavojiet 0,1% (vienu tūkstošdaļu) DEPC (ļoti toksiska viela) ar dejonizētu ūdeni, uzmanīgi izmantojiet to velkmes pārsegā un uzglabājiet 4°C temperatūrā prom no gaismas;

DEPC ūdens ir tīrs ūdens, kas apstrādāts ar DEPC un sterilizēts augstā temperatūrā un spiedienā.Pārbaudīts, vai tajā nav RNāzes, DNāzes un proteināzes.

2. Ievietojiet pipetes galu un EP cauruli 0,1% DEPC un pārliecinieties, ka pipetes uzgalis un EP caurule ir piepildīti ar 0,1% DEP.

3. Sargāt no gaismas, ļaujiet nostāvēties uz nakti (12-24h)

4. Kastīte, kurā ir uzgalis un EP caurule, nav jāmērcē DEPC.Pēc rupjas DEPC ūdens noņemšanas uzgalī vai EP caurulē iesaiņojiet to un aptiniet to.

5. 121 grāds pēc Celsija, 30min

6. 180 grādi pēc Celsija, žāvē vairākas stundas (vismaz 3 stundas)

Piezīme: a.Strādājot ar DEPC, valkājiet lateksa cimdus un maskas!b, vai bez DEPC sterilizācijas, 130 ℃, 90 min autoklāvs (daudzās laboratorijās augstas temperatūras sterilizācija divas reizes)

RNS ekstrakcijas apsvērumi

Divas galvenās audu RNS izolācijas neveiksmes parādības

RNS noārdīšanās un piemaisījumu atlikumi audos,Attiecībā uz degradāciju vispirms apskatīsim, kāpēc no kultivētām šūnām iegūtā RNS nav viegli noārdāma.Visi esošie RNS ekstrakcijas reaģenti satur komponentus, kas ātri inhibē RNāzi.Pievienojiet lizātu kultivētajām šūnām un vienkārši samaisiet, visas šūnas var rūpīgi sajaukt ar lizātu, un šūnas tiek pilnībā lizētas.Pēc šūnu lizēšanas aktīvās sastāvdaļas lizātā nekavējoties inhibē intracelulāro RNāzi, tāpēc RNS paliek neskarta.Proti, tā kā kultivētās šūnas ir viegli un pilnībā saskarē ar lizātu, to RNS nav viegli noārdāms;no otras puses, audos esošā RNS ir viegli noārdāma, jo šūnām audos nav viegli ātri sazināties ar lizātu.pietiekama kontakta dēļ.Tātad,Pieņemot, ka ir veids, kā audus pārvērst par vienu šūnu, vienlaikus kavējot RNS aktivitāti, degradācijas problēmu varētu pilnībā atrisināt.

Šķidrā slāpekļa malšana ir visefektīvākā šāda metode.Tomēr šķidrā slāpekļa malšanas metode ir ļoti apgrūtinoša, īpaši, ja paraugu skaits ir liels.Tas radīja nākamo labāko lietu: homogenizatoru.Thehomogenizatorsmetode neaplūko jautājumu par to, kā tiek inhibēta RNāzes aktivitāte, pirms šūnas nonāk saskarē ar lizātu, bet gan lūdz, lai audu sabrukšanas ātrums būtu ātrāks par ātrumu, ar kādu intracelulārā RNāze noārda RN.

Elektriskā homogenizatora iedarbība ir labāka,un stikla homogenizatora iedarbība ir slikta, taču kopumā homogenizatora metode nevar novērst degradācijas parādību.Tāpēc, ja ekstrakcija ir pasliktinājusies, malšanai ar šķidro slāpekli jāizmanto oriģinālais elektriskais homogenizators;oriģinālais stikla homogenizators ir jāmaina pret elektrisko homogenizatoru vai tieši jāsasmalcina ar šķidro slāpekli.Problēma ir gandrīz 100% iespējama.atrisināties.

Piemaisījumu atlieku problēmai, kas ietekmē turpmākos eksperimentus, ir vairāk dažādu iemeslu nekā degradācijai, un risinājumi ir attiecīgi atšķirīgi.Noslēgumā,ja audos ir noārdīšanās vai atlikušie piemaisījumi, ekstrakcijas metode/reaģents konkrētajam eksperimentālajam materiālam ir jāoptimizē.Jums nav jāizmanto savi vērtīgie paraugi optimizācijai: jūs varat iegādāties mazus dzīvniekus, piemēram, zivis/vistas no tirgus, paņemt atbilstošo materiāla daļu RNS ekstrakcijai, bet otru daļu olbaltumvielu ekstrakcijai – samalt ar muti, kuņģi un zarnu ekstraktu.

Ekstrahētās RNS mērķa RNS tiek izmantota dažādiem turpmākiem eksperimentiem, un tās kvalitātes prasības ir atšķirīgas

cDNS bibliotēkas uzbūvei nepieciešama RNS integritāte bez enzīmu reakcijas inhibitoru atliekām;Ziemeļiem nepieciešama augstāka RNS integritāte un zemākas prasības fermentu reakcijas inhibitoru atliekām;RT-PCR nav nepieciešama pārāk augsta RNS integritāte,bet kavē enzīmu reakcijas.Prasības attiecībā uz atliekām ir stingras.Ievade nosaka izvadi;katru reizi, kad mērķis ir iegūt visaugstākās tīrības pakāpes RNS, tas maksās cilvēkiem un naudu.

Paraugu ņemšana/uzglabāšana

Degradāciju ietekmējošie faktori Pēc tam, kad paraugs atstāj dzīvu ķermeni/vai sākotnējo augšanas vidi, paraugā esošie endogēnie enzīmi sāks noārdīt RNS,un noārdīšanās ātrums ir saistīts ar endogēno enzīmu saturu un temperatūru.Tradicionāli ir tikai divi veidi, kā pilnībā inhibēt endogēno enzīmu aktivitāti: nekavējoties pievienot lizātu un rūpīgi un ātri homogenizēt;sagriež mazos gabaliņos un nekavējoties sasaldē šķidrā slāpeklī.Abas pieejas prasa ātru darbību.Pēdējais ir piemērots visiem paraugiem, savukārt pirmais ir piemērots tikai audiem ar zemu šūnu un endogēno enzīmu saturu un vieglāk homogenizētiem.Konkrētāk, augu audus, aknas, aizkrūts dziedzeri, aizkuņģa dziedzeri, liesu, smadzenes, taukus, muskuļu audus utt., Pirms turpināt, vislabāk ir sasaldēt ar šķidro slāpekli.

Paraugu sadrumstalotība un homogenizācija

Degradāciju un ražu ietekmējošie faktori Paraugu sadrumstalotība irrūpīgai homogenizācijai, kas paredzēta pilnīgai un pilnīgai RNS atbrīvošanai.Šūnas var tieši homogenizēt, nesadalot.Audus var homogenizēt tikai pēc salauzšanas.Raugs un baktērijas ir jāsadala ar atbilstošiem fermentiem, pirms tos var homogenizēt.Audus ar mazāku endogēno enzīmu saturu un vieglāku homogenizāciju var sasmalcināt un homogenizēt vienā reizē lizātā ar homogenizatoru;augu audi, aknas, aizkrūts dziedzeris, aizkuņģa dziedzeris, liesa, smadzenes, tauki, muskuļu audi un citi paraugi, tajos ir daudz endogēno enzīmu vai tie nav viegli homogenizēti,tāpēc audu izjaukšana un homogenizācija jāveic atsevišķi.Visuzticamākā un produktīvākā sadrumstalotības metode ir malšana ar šķidro slāpekli, un visuzticamākā homogenizācijas metode ir elektriskā homogenizatora izmantošana.Īpaša piezīme par malšanu ar šķidro slāpekli: paraugu nedrīkst atkausēt visa malšanas procesa laikā, jo sasaldēti endogēnie enzīmi darbosies biežāk.

Lizāta izvēle

Ietekmē darbības ērtības un atlikušo endogēno piemaisījumu faktorus Parasti izmantotie līzes šķīdumi var gandrīz inhibēt RNāzes aktivitāti.Tāpēc galvenais, izvēloties līzes risinājumu, ir jāapsver kopā ar attīrīšanas metodi.Ir viens izņēmums:paraugiem ar augstu endogēno enzīmu saturu ieteicams izmantot lizātu, kas satur fenolu, lai palielinātu spēju inaktivēt endogēnos enzīmus.

Attīrīšanas metodes izvēle

Faktori, kas ietekmē atlikušos endogēnos piemaisījumus, ekstrakcijas ātrumu Tīriem paraugiem, piemēram, šūnām, apmierinošus rezultātus var iegūt ar gandrīz jebkuru pieejamo attīrīšanas metodi.Taču daudziem citiem paraugiem, īpaši tiem, kuros ir augsts piemaisījumu līmenis, piemēram, augi, aknas, baktērijas utt., ir ļoti svarīgi izvēlēties piemērotu attīrīšanas metodi.Kolonnas centrbēdzes attīrīšanas metodei ir ātrs ekstrakcijas ātrums un tā var efektīvi noņemt piemaisījumus, kas ietekmē turpmāko RNS fermentatīvo reakciju, taču tā ir dārga (Foregene var piedāvāt rentablus komplektus, sīkāku informāciju noklikšķiniet uzšeit);Arī izmantojot ekonomiskas un klasiskas attīrīšanas metodes, piemēram, LiCl izgulsnēšanu, var iegūt apmierinošus rezultātus, taču darbības laiks ir ilgs..

“Trīs disciplīnas un astoņas uzmanības” RNS ekstrakcijai

1. disciplīna:Izbeidziet eksogēno enzīmu piesārņojumu.

1. piezīme:Stingri valkājiet maskas un cimdus.

2. piezīme:Eksperimentā iesaistītās centrifūgas caurules, uzgaļu galviņas, pipetes stieņi, elektroforēzes tvertnes un eksperimentālie stendi ir rūpīgi jāiznīcina.

3. piezīme:Eksperimentā iesaistītajiem reaģentiem/šķīdumiem, īpaši ūdenim, jābūt bez RNāzes.

2. disciplīna:Bloķējiet endogēno enzīmu aktivitāti

4. piezīme:Izvēlieties piemērotu homogenizācijas metodi.

5. piezīme:Izvēlieties piemērotu lizātu.

6. piezīme:Kontrolējiet parauga sākuma daudzumu.

3. disciplīna:Noskaidrojiet ieguves mērķi

7. piezīme:Jebkurai lizāta sistēmai tuvojoties maksimālajam parauga sākuma daudzumam, ekstrakcijas panākumu līmenis strauji samazinās.

8. piezīme:Vienīgais ekonomiskais kritērijs veiksmīgai RNS ekstrakcijai ir panākumi turpmākajos eksperimentos, nevis raža.

10 populārākie RNāzes piesārņojuma avoti

1. Pirksti ir pirmais eksogēno enzīmu avots, tāpēc cimdi ir jāvalkā un bieži jāmaina.Turklāt jāvalkā arī maskas, jo arī elpošana ir svarīgs enzīmu avots.Papildu ieguvums, valkājot cimdu masku, ir aizsargāt eksperimentētāju.

2. Pipešu uzgaļi, centrifūgu mēģenes, pipetes – RNāzi nevar inaktivēt tikai sterilizējot, tāpēc pipešu uzgaļi un centrifūgas mēģenes jāapstrādā ar DEPC, pat ja tie ir atzīmēti kā apstrādāti ar DEPC.Vislabāk ir izmantot speciālu pipeti, pirms lietošanas noslaukiet to ar 75% spirta vates tamponu, īpaši stienīti;turklāt noteikti neizmantojiet galvas noņemšanas līdzekli.

3. Ūdenim/buferšķīdumam jābūt bez RNāzes piesārņojuma.

4. Vismaz testa galds jānoslauka ar 75% spirta vates bumbiņām.

5.Endogēnā RNāze Visi audi satur endogēnus enzīmus, tāpēc audu ātra sasaldēšana ar šķidro slāpekli ir labākais veids, kā samazināt degradāciju.Šķidrā slāpekļa uzglabāšanas/slīpēšanas metode patiešām ir neērta, taču tā ir vienīgā iespēja audiem ar augstu endogēno enzīmu līmeni.

6. RNS paraugi RNS ekstrakcijas produkti var saturēt RNāzes piesārņojuma pēdas.

7. Plazmīdu ekstrakcija Plazmīdu ekstrakcijā RNS noārdīšanai bieži izmanto Rnāzi, un atlikušā Rnāze ir jāsagremo ar proteināzi K un ekstrahē ar PCI.

8. RNS uzglabāšana Pat ja to uzglabā zemā temperatūrā, neliels daudzums RNāzes izraisīs RNS degradāciju.Labākais risinājums ilgstošai RNS saglabāšanai ir sāls/spirta suspensija, jo alkohols zemā temperatūrā nomāc visu fermentatīvo aktivitāti.

9. Kad katjoni (Ca, Mg) satur šos jonus, karsēšana 80C temperatūrā 5 minūtes izraisīs RNS šķelšanos, tādēļ, ja RNS ir jākarsē, konservēšanas šķīdumā jāsatur helātu veidojošs līdzeklis (1mM nātrija citrāts, pH 6,4).

10. Turpmākajos eksperimentos izmantotie enzīmi var būt piesārņoti ar RNāzi.

10 padomi RNS ekstrakcijai

1: ātri novērsiet RNāzes aktivitāti.Pēc savākšanas paraugi tiek ātri sasaldēti, un RNāze tiek inaktivēta ar ātru darbību līzes laikā.

2. Izvēlieties piemērotu ekstrakcijas metodi audiem ar augstu ribozīma saturu, un taukaudos vislabāk ir izmantot metodi, kas satur fenolu.

3: Prognozes kvalitātei nepieciešama ziemeļu, cDNS bibliotēkas izveidei nepieciešama augsta integritāte, un RT-PCR un RPA (Ribonukleāzes aizsardzības tests) nav nepieciešama augsta integritāte.RT-PCR nepieciešama augsta tīrība (enzīmu inhibitoru atliekas).

4: rūpīga homogenizācija ir atslēga, lai uzlabotu ražu un samazinātu degradāciju.

5: pārbaudiet RNS elektroforēzes noteikšanas integritāti, 28S: 18S = 2: 1 ir pilnīga zīme, 1: 1 ir arī pieņemams lielākajai daļai eksperimentu.

6: DNS noņemšana RT-PCR, masīvu analīzei Vislabāk ir izmantot Dnāzi I DNS noņemšanai.

7: Samaziniet eksogēno enzīmu piesārņojumu – fermentus nevar ievest no ārpuses.

8: Koncentrējot zemas koncentrācijas nukleīnskābi, jāpievieno līdzizgulsnēšanas reaģents.Bet, lai novērstu koprecipitantu, kas satur fermentus un DNS piesārņojumu.

9: Rūpīgi izšķīdiniet RNS, ja nepieciešams, karsējiet 65C 5 minūtes.

piemērota uzglabāšanas metode

Pie –20C to var uzglabāt īsu laiku, bet pie –80C ilgstoši.Pirmais solis, lai uzlabotu RNS ražu, ir saprast, ka RNS saturs dažādos paraugos ir ļoti atšķirīgs.Liels daudzums (2–4 ug/mg), piemēram, aknas, aizkuņģa dziedzeris, sirds, vidēji daudz (0,05–2 ug/mg), piemēram, smadzenes, embrijs, nieres, plaušas, aizkrūts dziedzeris, olnīcas, mazs daudzums (<0,05 ug/mg) mg), piemēram, urīnpūslis, kauli, tauki.

1: Līzes šūnas, lai atbrīvotu RN – ja RNS neizdalās, raža tiks samazināta.Elektriskā homogenizācija darbojas labāk nekā citas homogenizācijas metodes, taču, iespējams, tā ir jāapvieno arī ar citām metodēm, piemēram, šķidrā slāpekļa sasmalcināšanu, fermentatīvo šķelšanu (lizocīms/liticāze)

2: ekstrakcijas metodes optimizācija.Lielākās problēmas ar fenola bāzes metodēm ir nepilnīga noslāņošanās un daļējs RNS zudums (supernatantu nevar pilnībā noņemt).Nepilnīga noslāņošanās ir saistīta ar augstu nukleīnskābju un olbaltumvielu saturu, ko var atrisināt, palielinot izmantotā lizāta daudzumu vai samazinot parauga daudzumu.Taukaudiem tika pievienots hloroforma ekstrakcijas posms.RNS zudumu var samazināt, sūknējot atpakaļ vai noņemot organisko slāni, kam seko centrifugēšana.Lielākā problēma ar kolonnu centrifugēšanas metodēm ir parauga pārpalikums.

Klasiski ekstrakcijas padomi

1. Fenola attīrīšana: pievienojiet vienādu tilpumu fenola/hloroforma 1:1 un enerģiski samaisiet 1-2 minūtes.Centrifugējiet ar lielu ātrumu 2 minūtes.Uzmanīgi noņemiet supernatantu (80-90%).Nekad nenokļūstiet līdz vidējam slānim.Vienādu tilpumu reakcijas šķīduma var pievienot fenolam/hloroformam un noņemt supernatantu.Abus supernatantus var sajaukt kopā nukleīnskābju nogulsnēšanai, lai uzlabotu ražu.Neesiet pārāk maigs maisīšanas laikā un nemēģiniet noņemt visu supernatantu.

2. Mazgāšana ar 70-80% etanolu: Mazgāšanas laikā nukleīnskābe ir jā suspendē, lai nodrošinātu, ka sāls paliekas tiek nomazgātas.Tajā pašā laikā tūlīt pēc etanola izliešanas centrifugējiet ar lielu ātrumu dažas sekundes un pēc tam noņemiet etanola atlikumu ar pipeti.Izšķīdina pēc nostāvēšanas istabas temperatūrā 5-10 minūtes.

11. Speciālo organizāciju ieguve

1. Šķiedru audi: RNS ekstrakcijas atslēga no šķiedru audiem, piemēram, sirds/skeleta muskuļiem, ir pilnībā izjaukt audus.Šiem audiem ir zems šūnu blīvums, tāpēc RNS daudzums uz audu svara vienību ir mazs, un vislabāk ir izmantot pēc iespējas vairāk sākuma daudzuma.Saldēšanas apstākļos noteikti rūpīgi sasmalciniet audus.

2. Audi ar augstu olbaltumvielu/tauku saturu: smadzeņu/augu tauku saturs ir augsts.Pēc PCI ekstrakcijas supernatants satur baltas flokulas.Supernatants atkārtoti jāekstrahē ar hloroformu.

3. Audi ar augstu nukleīnskābju/ribozīma saturu: liesā/akrūts dziedzerī ir augsts nukleīnskābju un ribozīmu saturs.Audu slīpēšana sasalšanas apstākļos, kam seko ātra homogenizācija, var efektīvi inaktivēt ribozīmus.Tomēr, ja lizāts ir pārāk viskozs (augsta nukleīnskābju satura dēļ), PCI ekstrakcija nespēs efektīvi stratificēties;pievienojot vairāk lizāta, šo problēmu var atrisināt.Vairākas PCI ekstrakcijas var noņemt vairāk atlikuma DNS.Ja uzreiz pēc spirta pievienošanas veidojas baltas nogulsnes, tas norāda uz DNS piesārņojumu.Atkārtota ekstrakcija ar skābu PCI pēc izšķīdināšanas var noņemt DNS piesārņojumu.

4. Augu audi: augu audi ir sarežģītāki nekā dzīvnieku audi.Parasti augus sasmalcina šķidrā slāpekļa apstākļos, tāpēc RNS noārdīšanās ar endogēno enzīmu palīdzību ir retāk sastopama.Ja degradācijas problēma netiek atrisināta, to gandrīz noteikti izraisa paraugā esošie piemaisījumi.Daudzos augos esošie piemaisījumi radīs atliekas, un atlieku cēlonis bieži ir tāpēc, ka šiem piemaisījumiem ir dažas līdzības ar RNS: jūs izgulsnējat un es izgulsnēju, un jūs adsorbējat un es adsorbēju.Šīs īpašības nosaka, ka tie ir ļoti spēcīgi enzīmu inhibitori.

Pašlaik komerciālos RNS ekstrakcijas reaģentus var pielāgot gandrīz visiem dzīvnieku audiem ar nelielām korekcijām, taču ir maz komerciālu RNS ekstrakcijas reaģentu, kas var būt piemēroti lielākajai daļai augu audu.Par laimi, Foregene var nodrošināt īpašuaugu RNS ekstrakcijas komplekti, mums irAugu kopējās RNS izolācijas komplekts, Augu kopējā RNS izolācijas komplekts Plus.Pēdējais ir īpaši izstrādāts augiem ar augstu polisaharīdu un polifenolu saturu.RNS ekstrakcijai laboratorijas lietotāju atsauksmes ir īpaši labas.

12. Parauga sasaldēšanas un atkausēšanas ietekme Sasaldētais paraugs var būt lielāks, un tas ir jāsagriež pirms izmantošanas RNS ekstrakcijai.Griešanas laikā paraugi mēdz kust (iespējams, daļēji).Pirms RNS ekstrakcijas var būt nepieciešams nosvērt saldētus paraugus, un šī procesa laikā noteikti notiks atkausēšana.Dažkārt parauga atkausēšana notiek arī šķidrā slāpekļa malšanas procesā;vai arī sasaldēto paraugu tieši pievieno lizātam bez šķidrā slāpekļa malšanas, un pirms pilnīgas homogenizācijas noteikti notiks atkausēšana.Eksperimenti ir parādījuši, ka saldēti audi ir vairāk pakļauti RNS degradācijai atkausēšanas laikā nekā svaigi audi.Iespējamais iemesls: sasaldēšanas-atkausēšanas process izjauc struktūras šūnā, atvieglojot endogēno enzīmu tiešu saskari ar RNS.

13. RNS kvalitātes vērtēšana Parasti RNS integritātes noteikšanai izmanto elektroforēzi, bet RNS tīrības noteikšanai izmanto A260/A280.Teorētiski neskartas RNS attiecība ir 28S:18S = 2,7:1, un lielākā daļa datu uzsver attiecību 28S:18S = 2:1.Fakts ir tāds, ka gandrīz neviena no RNS, kas iegūta no paraugiem, izņemot šūnas, nav proporcijā 2: 1 (tas tika iegūts, izmantojot Agilent Bioanalyzer).

RNS elektroforēzes rezultātus ietekmē daudzi faktori, tostarp sekundārā struktūra, elektroforēzes apstākļi, parauga slodze, EB piesātinājuma pakāpe utt. Izmantojiet dabisko elektroforēzi, lai noteiktu RNS, un izmantojiet DNS marķieri kā kontroli.Ja 28S pie 2 kb un 18S pie 0,9 kb ir skaidrs un 28S: 18S > 1, integritāte var atbilst vairuma turpmāko eksperimentu prasībām.

A260/A280 ir indikators, kas radījis daudz neskaidrību.Pirmkārt, ir jānoskaidro šī indikatora sākotnējā nozīme nukleīnskābēm: tīra RNS, tās A260/280 = aptuveni 2,0.Tīra RNS ir “cēlonis”, un A260/A280 = 2 ir “efekts”.Tagad visi izmanto A260/A280 kā “iemeslu”, domājot, ka “ja A260/A280 = 2, tad RNS ir tīra”, kas, protams, rada neskaidrības.

Ja jūs interesē, varat savam RNS paraugam pievienot nedaudz reaģenta, ko bieži izmanto ekstrakcijā, piemēram, fenolu, guanidīna izotiocianātu, PEG utt., un pēc tam izmērīt A260/A280 attiecību.Realitāte ir tāda, ka daudzi RNS ekstrakcijai izmantotie reaģenti, kā arī daudzi parauga piemaisījumi absorbē aptuveni A260 un A280, ietekmējot A260/A280.

Pamācošākā pieeja pašlaik ir RNS paraugu skenēšana 200–300 nm diapazonā.Tīras RNS līknei ir šādas īpašības: līkne ir gluda, A230 un A260 ir divi lēciena punkti, A300 ir tuvu 0, A260/A280 = aptuveni 2,0 un A260/A230 = aptuveni 2,0.Ja skenēšanas dati nav pieejami, ir jānosaka arī A260/A230 attiecība, jo šī attiecība ir jutīgāka pret visu piemaisījumu pārnešanu, kas ietekmē fermentatīvo reakciju.Ņemiet vērā ierīces lineāro diapazonu (0,1–0,5 A260).

Ir vēl divas noderīgas parādības: attiecība būs par aptuveni 0,3 zemāka, ja A260/A280 mēra ūdenī;savukārt attiecība, ko mēra ar 10 mM EDTA, ir par aptuveni 0,2 augstāka nekā ar 1 mM EDTA.

Saistītie produkti:

China Plant Total RNA Isolation Kit ražotājs un piegādātājs |Foregene (foreivd.com)

RNS izolācijas sērijas piegādātāji un rūpnīcas |Ķīnas RNS izolācijas sērijas ražotāji (foreivd.com)

RNS izolācijas sērija – Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)