Dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts Kopējais RNS ekstrakcijas un attīrīšanas komplekts dzīvnieku audiem un šūnām
Komplekta apraksts:
Ātri un efektīvi ekstrahē augstas tīrības un augstas kvalitātes kopējo RNS no dažādiem dzīvnieku audiem.
Nav jāuztraucas par RNS degradāciju.Visa sistēma ir bez RNāzes
Efektīvi noņemiet DNS, izmantojot DNS tīrīšanas kolonnu
Noņemiet DNS, nepievienojot DNāzi
Vienkārši — visas darbības tiek veiktas istabas temperatūrā
Ātri — darbību var pabeigt 30 minūtēs
Drošs — netiek izmantots organiskais reaģents
Augsta tīrība — OD260/280≈1,8-2,1
Komplektu apraksti
50 sagatavošanās, 200 sagatavošanās
Šajā komplektā tiek izmantotsspin kolonna un formulamūsu kompānijas izstrādāta, kas var iegūt augstas tīrības pakāpes un kvalitatīvu kopējo RNS no dažādiem dzīvnieku audiem ar augstu efektivitāti. Tas nodrošina efektīvu DNS tīrīšanas kolonnu, kas var viegli atdalīt un adsorbēt genoma DNS no supernatanta un audu lizāta, vienkārši un ietaupot laiku;Tikai RNS kolonna var efektīvi saistīt RNS, un to var apstrādāt vienlaikus ar unikālu formulu. Daudz paraugu.
Visa sistēma ir bez RNāzes, tāpēc iegūtā RNS netiek degradēta;Buferis RW1, Buferis RW2 bufera mazgāšanas sistēma, lai iegūtā RNS nebūtu proteīnu, DNS, jonu un organisko savienojumu piesārņojuma.
Komplekta sastāvdaļas
| Dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts | ||
| Komplekta sastāvdaļas | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buferis RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buferis RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buferis RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Tikai RNS kolonna | 50 | 200 |
| DNS tīrīšanas kolonna | 50 | 200 |
| Instrukcijas | 1 gab | 1 gab |
Informācija par produktu
| Formāts | Spin kolonna | Attīrīšanas sastāvdaļa | Foregene kolonna, reaģents |
| Flux | 1-24 paraugi | Laiks vienai sagatavošanai | ~30 min (24 paraugi) |
| Centrifūga | Galda centrifūga | Pirolīzes atdalīšana | Centrbēdzes atdalīšana |
| Paraugs | Dzīvnieku audi;šūna | Paraugu daudzums | Audi: 10-20 mg;Šūna: (1–5) × 106 |
| Elucijas tilpums | 50-200 μL | Maksimālais iekraušanas apjoms | 850 μl |
Īpašības un priekšrocības
■ Nav jāuztraucas par RNS degradāciju;visa sistēma ir bez RNāzes
■ Efektīvi noņemiet DNS, izmantojot DNS tīrīšanas kolonnu
■ Noņemiet DNS, nepievienojot DNāzi
■ Visas vienkāršas darbības tiek veiktas istabas temperatūrā
■ Ātru darbību var pabeigt 30 minūtēs
■ Drošs — nav nepieciešams organiskais reaģents
■ Augsta tīrība -OD260/280≈1,8-2,1
Komplekta pielietojums
Tas ir piemērots kopējās RNS ekstrakcijai un attīrīšanai no dažādiem svaigiem vai saldētiem dzīvnieku audiem vai kultivētām šūnām.
Produkta parametri
■ Pakārtotie pielietojumi: pirmās virknes cDNS sintēze, RT-PCR, molekulārā klonēšana, Northern Blot u.c.
■ Paraugi: dzīvnieku audi, kultivētas šūnas
■ Devas: audi 10–20 mg, šūnas (2–5) × 106
■ Maksimālā attīrīšanas kolonnas DNS saistīšanās spēja: 80 μg
■ Elucijas tilpums: 50-200 μl
Diagramma
Dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts, apstrādāts 20 mg
Svaigi peles paraugi, ņem 5% attīrīta kopējā RNS 1% agara
Glikogēla elektroforēze
1: liesa 2: nieres
3: aknas 4: sirds
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Komplektu var uzglabāt 24 mēnešus istabas temperatūrā (15-25 ℃) vai 2-8 ℃ ilgāk.Buferšķīdumu RL1 var uzglabāt 4 ℃ 1 mēnesi pēc β-merkaptoetanola pievienošanas (pēc izvēles).
Citēti raksti
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R. u.c.mRNS ielādētas lipīdiem līdzīgas nanodaļiņas aknu bāzes rediģēšanai, optimizējot centrālo kompozītmateriālu dizainu.Adv.Funkcija.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J u.c.Spontāna šūnu apoptoze terapeitiskā cilmes šūnu preparātā rada imūnmodulējošu iedarbību, atbrīvojot fosfatidilserīnu.Signal Transduct Target Ther.2021. gada 14. jūlijs; 6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97: Dai Z, Liu H, Liao J u.c.N7-metilguanozīna tRNS modifikācija uzlabo onkogēno mRNS translāciju un veicina intrahepatiskās holangiokarcinomas progresēšanu.Mol Cell.2021. gada 29. jūlijs: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9,225: Cao X, Shu Y, Chen Y u.c.Mettl14 mediētā m6A modifikācija atvieglo aknu atjaunošanos, saglabājot endoplazmatiskā retikulāta homeostāzi.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNS izolēšanas komplekti citi izlases avotiIr pieejams:
Šūna, augs, vīruss, asinis utt.
RNS netiek ekstrahēta vai RNS iznākums ir zems
Bieži vien ir dažādi faktori, kas ietekmē atgūšanas efektivitāti, piemēram: audu parauga RNS saturs, darbības metode, eluēšanas tilpums utt.
1. Darbības laikā veikta ledus vanna vai kriogēnā (4 °C) centrifugēšana.
Ieteikums: Darbiniet istabas temperatūrā (15-25 ° C) visa procesa laikā, nelieciet ledus vannā un centrifugējiet zemā temperatūrā.
2. Nepareiza paraugu saglabāšana vai pārmērīgs paraugu uzglabāšanas laiks.
Ieteikums: Uzglabājiet paraugus -80 °C temperatūrā vai sasaldējiet šķidrā slāpeklī un izvairieties no atkārtotas sasaldēšanas-atkausēšanas;RNS ekstrakcijai mēģiniet izmantot svaigus audus vai kultivētas šūnas.
3. Nepietiekama parauga līze.
Ieteikums: homogenizējot audus, pārliecinieties, ka audi ir pietiekami homogenizēti un audu šūnas ir pietiekami sadalītas, lai izskaidrotu RNS izdalīšanos.
4. Eluents nav pievienots pareizi.
Ieteikums: apstipriniet, ka RNase-Free ddH2Attīrīšanas kolonnas membrānas vidum pa pilienam pievieno O.
5. Buferim RL2 vai Buferim RW2 netika pievienots pareizais absolūtā etanola daudzums.
Ieteikums: izpildiet norādījumus, pievienojiet pareizo absolūtā etanola daudzumu buferšķīdumam RL2 un Buffer RW2 un labi samaisiet pirms komplekta lietošanas.
6. Audu parauga deva nav piemērota.
Ieteikums: izmantojiet 10–20 mg audu vai (1–5) × 106šūnas uz 500 μl buferšķīduma RL1, jo pārmērīga audu izmantošana var samazināt RNS ekstrakciju.
7. Nepareizs eluēšanas tilpums vai nepilnīga eluēšana.
Ieteikums: attīrīšanas kolonnas eluēšanas tilpums ir 50-200 μl;ja eluēšanas efekts nav apmierinošs, pēc iepriekš uzkarsēta RNase-Free ddH pievienošanas ieteicams pagarināt novietošanas laiku istabas temperatūrā.2O, piemēram, 5-10 min.
8. Attīrīšanas kolonnā pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas ir etanola atlikumi.
Ieteikums: ja pēc buferšķīduma RW2 mazgāšanas, tukšas mēģenes centrifugēšanas 1 minūti ir etanola atliekas, tukšās mēģenes centrifugēšanas laiku var palielināt līdz 2 minūtēm vai arī attīrīšanas kolonnu var novietot istabas temperatūrā uz 5 minūtēm, lai adekvāti noņemtu atlikušo etanolu.
Attīrīta RNS tiek noārdīta
Attīrītās RNS kvalitāte ir saistīta ar tādiem faktoriem kā parauga saglabāšana, RNāzes piesārņojums un manipulācijas utt.
1. Audu paraugi netiek glabāti laikā.
Ieteikums: Ja audu paraugi vai šūnas pēc savākšanas netiek izmantotas laikus, nekavējoties iznīciniet -80 °C vai šķidrā slāpeklī.Lai ekstrahētu RNS, kad vien iespējams, izmantojiet tikko ņemtu audu vai šūnu paraugu.
2. Atkārtota audu paraugu sasaldēšana-atkausēšana.
Ieteikums: Uzglabājot audu paraugus, vislabāk tos sagriezt mazos gabaliņos konservēšanai un, tos lietojot, noņemt vienu no gabaliņiem, lai izvairītos no atkārtotas parauga sasaldēšanas-atkausēšanas un RNS noārdīšanās.
3. Operācijas laikā tiek ievadīta RNāze vai netiek valkāti vienreizējās lietošanas cimdi, maskas utt.
Ieteikums: RNS ekstrakcijas eksperimentus vislabāk veikt atsevišķās RNS manipulācijas telpās, un pirms eksperimenta galdu notīra.
Eksperimenta laikā valkājiet vienreizējās lietošanas cimdus un maskas, lai samazinātu RNS degradāciju, ko izraisa RNāzes ievadīšana.
4. Reaģenti lietošanas laikā ir piesārņoti ar RNāzi.
Ieteikums: nomainiet ar jaunu dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplektu saistītiem eksperimentiem.
5. RNS manipulācijās izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi utt. ir piesārņoti ar RNāzi.
Ieteikums: Pārliecinieties, ka RNS ekstrakcijā izmantotās centrifūgas mēģenes, uzgaļi, pipetes utt. nesatur RNāzes.
Attīrīta iegūtā RNS ietekmē pakārtotos eksperimentus
RNS, kas attīrīta ar attīrīšanas kolonnu, ja sāls joni, olbaltumvielu saturs ir pārāk liels, ietekmēs pakārtoto eksperimentu, piemēram: reversā transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluētajā RNS ir sāls jonu atliekas.
Ieteikums: apstipriniet, ka buferšķīdumam RW2 ir pievienots pareizais etanola daudzums, un veiciet 2 attīrīšanas kolonnas mazgāšanu ar darbībai norādīto centrbēdzes ātrumu;ja ir sāls jonu atlikumi, atstājiet attīrīšanas kolonnu buferšķīdumā RW2 uz 5 minūtēm istabas temperatūrā un veiciet centrifugēšanu, lai maksimāli noņemtu sāls piesārņojumu.
2. Etanola atlikums eluētajā RNS.
Ieteikums: Apstipriniet, ka pēc bufera RW2 mazgāšanas veiciet tukšas mēģenes centrifugēšanas darbību ar darbībai norādīto centrifugēšanas ātrumu, palieliniet tukšās mēģenes centrifugēšanas darbības laiku līdz 2 minūtēm, ja vēl ir etanola atlikumi, vai atstājiet to istabas temperatūrā 5 minūtes pēc tukšas mēģenes centrifugēšanas, lai maksimāli noņemtu etanola atlikumus.
