Cell Direct RT qPCR komplekts — SYBR GREEN I tiešās šūnu līzes šūnām gatavi vienpakāpes qRT-PCR komplekti
Apraksti
Šajā komplektā tiek izmantota unikāla līzes bufera sistēma, kas var ātri atbrīvot RNS no kultivētiem šūnu paraugiem RT-qPCR reakcijām, tādējādi novēršot laikietilpīgo un darbietilpīgo RNS attīrīšanas procesu.RNS veidni var iegūt tikai 7 minūtēs.5×Direct RT Mix un 2×Komplektā iekļautie tiešie qPCR Mix-SYBR reaģenti var ātri un efektīvi iegūt reāllaika kvantitatīvos PCR rezultātus.
5×Direct RT Mix un 2×Direct qPCR Mix-SYBR ir spēcīga inhibitoru tolerance, un paraugu lizātu var tieši izmantot kā veidni RT-qPCR.Šis komplekts satur unikālo RNS augstas afinitātes Foregene reverso transkriptāzi un Hot D-Taq DNS polimerāzi, dNTP, MgCl.2, reakcijas buferis, PCR optimizētājs un stabilizators.
Specifikācijas
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komplekta sastāvdaļas
| I daļa | Buferis CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buferis ST | |
| II daļa | DNS dzēšgumija |
| 5 × tiešā RT sajaukšana | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX atsauces krāsa | |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | |
| Instrukcijas | |
Īpašības un priekšrocības
■Vienkārši un efektīvi: ar Cell Direct RT tehnoloģiju RNS paraugus var iegūt tikai 7 minūtēs.
■ Izlases pieprasījums ir mazs, var pārbaudīt pat 10 šūnas.
■ Liela caurlaidspēja: tā var ātri noteikt RNS šūnās, kas kultivētas 384, 96, 24, 12, 6 bedrīšu plāksnēs.
■ DNS Eraser var ātri noņemt atbrīvotos genomus, ievērojami samazinot ietekmi uz turpmākajiem eksperimenta rezultātiem.
■ Optimizētā RT un qPCR sistēma padara divpakāpju RT-PCR reverso transkripciju efektīvāku un PCR specifiskāku un izturīgāku pret RT-qPCR reakcijas inhibitoriem.
Komplekta pielietojums
Pielietojuma joma: kultivētas šūnas.
- RNS, kas izdalās parauga līzes rezultātā: attiecas tikai uz šī komplekta RT-qPCR veidni.
- Komplektu var izmantot šādiem mērķiem: gēnu ekspresijas analīzei, siRNS mediētā gēnu klusēšanas efekta pārbaudei, zāļu skrīningam utt.
Diagramma
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Šī komplekta I daļa jāuzglabā 4℃ temperatūrā;II daļa jāuzglabā -20 ℃.
Foregene Protease Plus II jāuzglabā 4℃, nesasaldēt pie -20 ℃.
2. reaģents×Direct qPCR Mix-SYBR jāuzglabā temperatūrā -20℃tumsā;ja to lieto bieži, to var uzglabāt arī 4℃ īslaicīgai uzglabāšanai (izlietot 10 dienu laikā).
Reālā laika PCR primer dizaina principi
Forward Primer un Reverse Primer
Reāllaika PCR gadījumā primer dizains ir ļoti svarīgs.Praimeri ir saistīti ar PCR amplifikācijas specifiku un efektivitāti, un tos var veidot, pamatojoties uz šādiem principiem:
Primer garums: 18-30bp.
GC saturs: 40-60%.
Tm vērtība: Primer projektēšanas programmatūra, piemēram, Primer 5, var norādīt gruntskrāsas Tm vērtību.Augšējā un lejtecē esošo primeru Tm vērtībām jābūt pēc iespējas tuvākām.Var izmantot arī Tm aprēķina formulu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Veicot PCR, par atkausēšanas temperatūru parasti tiek izvēlēta temperatūra, kas ir zemāka par primera Tm vērtību 5 °C (atbilstošs atkausēšanas temperatūras paaugstinājums var palielināt PCR reakcijas specifiku).
Primeri un PCR produkti:
Dizaina primer PCR amplifikācijas produkta garums ir vēlams 100-150 bp.
Pēc iespējas jāizvairās no dizaina gruntēšanas veidnes sekundārajā strukturālajā zonā.
Izvairieties no 2 vai vairāk komplementāru bāzu veidošanās starp augšpus un lejpus esošajiem gruntskrāsām 3′ galiem.
Primer 3′ spailes pamatne nevar būt ar 3 papildu secīgiem G vai C.
Pašiem praimeriem nevar būt komplementāras struktūras, pretējā gadījumā veidosies matadata struktūra, kas ietekmēs PCR amplifikāciju.
ATCG ir jāsadala pēc iespējas vienmērīgāk primeru secībā, un jāizvairās no 3′ gala bāzes kā T.
1. pielikums: Cell Direct RT-qPCR komplekta komponentu papildpakete
1.Šūnu līzes šķīdums
|
| |||
| Komplekta sastāvdaļas (24 bedrīšu līzes sistēma / iedobe) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| daļaes | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| daļaII | DNS dzēšgumija | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × tiešā RT sajaukšana | 800 μl |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX atsauces krāsa | 40 μl | 200 μl |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Lietošanas rokasgrāmatas:
