• facebook
  • linkedin
  • youtube
page_banner

Cell Direct RT qPCR komplekts — SYBR GREEN I tiešās šūnu līzes šūnu gatavības vienpakāpes qRT-PCR komplekti

Komplekta apraksts:

Kat.Nr.DRT-01011/01012

Šūnu tiešai RT-qPCR, izmantojot 10–1 000 000 šūnas,

un veicot RT-qPCR tieši no šūnām bez iepriekšējas RNS attīrīšanas.

Šūnas tiek tieši lizētas, lai atbrīvotu RNS RT-qPCR;augstās tolerances sistēmas dēļ nav nepieciešams attīrīt RNS un tieši izmantot šūnu lizātus kā RNS veidnes RT reakcijām.Ātri un ērti;augsta jutība, spēcīga specifika un laba stabilitāte.

◮Vienkārši un efektīvi: ar Cell Direct RT tehnoloģiju RNS paraugus var iegūt tikai 7 minūtēs.

Izlases pieprasījums ir mazs, var pārbaudīt pat 10 šūnas.

◮ Augsta caurlaidspēja: tas var ātri noteikt RNS šūnās, kas kultivētas 384, 96, 24, 12, 6 iedobju plāksnēs.

DNS Eraser var ātri noņemt atbrīvotos genomus, ievērojami samazināt ietekmi uz turpmākajiem eksperimenta rezultātiem.

Optimizētā RT un qPCR sistēma padara divpakāpju RT-PCR reverso transkripciju efektīvāku un PCR specifiskāku un izturīgāku pret RT-qPCR reakcijas inhibitoriem.


Produkta informācija

Produktu etiķetes

FAQ

Lejupielādēt resursus

Apraksti

Šajā komplektā tiek izmantota unikāla līzes bufera sistēma, kas var ātri atbrīvot RNS no kultivētiem šūnu paraugiem RT-qPCR reakcijām, tādējādi novēršot laikietilpīgo un darbietilpīgo RNS attīrīšanas procesu.RNS veidni var iegūt tikai 7 minūtēs.5×Direct RT Mix un 2×Komplektā iekļautie tiešie qPCR Mix-SYBR reaģenti var ātri un efektīvi iegūt reāllaika kvantitatīvos PCR rezultātus.

5×Direct RT Mix un 2×Direct qPCR Mix-SYBR ir spēcīga inhibitoru tolerance, un paraugu lizātu var tieši izmantot kā veidni RT-qPCR.Šis komplekts satur unikālo RNS augstas afinitātes Foregene reverso transkriptāzi un Hot D-Taq DNS polimerāzi, dNTP, MgCl.2, reakcijas buferis, PCR optimizētājs un stabilizators.

Specifikācijas

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Komplekta sastāvdaļas

I daļa

Buferis CL

Foregene Protease Plus II

Buferis ST

II daļa

DNS dzēšgumija

5 × tiešā RT sajaukšana

2× Direct qPCR Mix-SYBR

50× ROX atsauces krāsa

RNāzes nesaturošs ddH2O

Instrukcijas

Īpašības un priekšrocības

Vienkārši un efektīvi: ar Cell Direct RT tehnoloģiju RNS paraugus var iegūt tikai 7 minūtēs.

■ Izlases pieprasījums ir mazs, var pārbaudīt pat 10 šūnas.

■ Liela caurlaidspēja: tā var ātri noteikt RNS šūnās, kas kultivētas 384, 96, 24, 12, 6 bedrīšu plāksnēs.

■ DNS Eraser var ātri noņemt atbrīvotos genomus, ievērojami samazinot ietekmi uz turpmākajiem eksperimenta rezultātiem.

■ Optimizētā RT un qPCR sistēma padara divpakāpju RT-PCR reverso transkripciju efektīvāku un PCR specifiskāku un izturīgāku pret RT-qPCR reakcijas inhibitoriem.

Komplekta pielietojums

Pielietojuma joma: kultivētas šūnas.

- RNS, kas izdalās parauga līzes rezultātā: attiecas tikai uz šī komplekta RT-qPCR veidni.

- Komplektu var izmantot šādiem mērķiem: gēnu ekspresijas analīzei, siRNS mediētā gēnu klusēšanas efekta pārbaudei, zāļu skrīningam utt.

Diagramma

Cell Direct RT qPCR diagramma

Uzglabāšana un glabāšanas laiks

Šī komplekta I daļa jāuzglabā 4℃ temperatūrā;II daļa jāuzglabā -20 ℃.

 Foregene Protease Plus II jāuzglabā 4℃, nesasaldēt pie -20 ℃.

 2. reaģents×Direct qPCR Mix-SYBR jāuzglabā temperatūrā -20tumsā;ja to lieto bieži, to var uzglabāt arī 4℃ īslaicīgai uzglabāšanai (izlietot 10 dienu laikā).


  • Iepriekšējais:
  • Nākamais:

  • Reālā laika PCR primer dizaina principi

    Forward Primer un Reverse Primer

    Reāllaika PCR gadījumā primer dizains ir ļoti svarīgs.Praimeri ir saistīti ar PCR amplifikācijas specifiku un efektivitāti, un tos var veidot, pamatojoties uz šādiem principiem:

    Primer garums: 18-30bp.

    GC saturs: 40-60%.

    Tm vērtība: Primer projektēšanas programmatūra, piemēram, Primer 5, var norādīt gruntskrāsas Tm vērtību.Augšējā un lejtecē esošo primeru Tm vērtībām jābūt pēc iespējas tuvākām.Var izmantot arī Tm aprēķina formulu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Veicot PCR, par atkvēlināšanas temperatūru parasti tiek izvēlēta temperatūra, kas zemāka par primera Tm vērtību 5 °C (atbilstošs atkausēšanas temperatūras paaugstinājums var palielināt PCR reakcijas specifiku).

    Primeri un PCR produkti:

    Dizaina primer PCR amplifikācijas produkta garums ir vēlams 100-150 bp.

    Pēc iespējas jāizvairās no dizaina gruntēšanas veidnes sekundārajā strukturālajā zonā.

    Izvairieties no 2 vai vairāk komplementāru bāzu veidošanās starp augšpus un lejpus esošajiem gruntskrāsām 3′ galiem.

    Primer 3′ spailes pamatne nevar būt ar 3 papildu secīgiem G vai C.

    Pašiem praimeriem nevar būt komplementāras struktūras, pretējā gadījumā veidosies matadata struktūra, kas ietekmēs PCR amplifikāciju.

    ATCG ir jāsadala pēc iespējas vienmērīgāk primeru secībā, un jāizvairās no 3′ gala bāzes kā T.

    1. pielikums: Cell Direct RT-qPCR komplekta komponentu papildpakete

    1.Šūnu līzes šķīdums


    Šūnu līzes šķīdums

    Komplekta sastāvdaļas

    (24 bedrīšu līzes sistēma / iedobe)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 T

    500 T

    daļaes

    Buferis CL

    20 ml

    100 ml

    Foregene Protease Plus II

    400 μl

    1 ml × 2

    Buferis ST

    1 ml × 2

    10 ml

    daļaII

    DNS dzēšgumija

    400 μl

    1 ml × 2

    2.RT Mix


    RT maisījums

    Komplekta sastāvdaļas

    (20 μl reakcijas sistēma)

    DRT-01011-B1

    200 T

    5 × tiešā RT sajaukšana

    800 μl

    RNāzes nesaturošs ddH2O

    1,7 ml × 2

     

    3.qPCR maisījums


    qPCR maisījums

    Komplekta sastāvdaļas

    (20 μl reakcijas sistēma)

    DRT-01011-C1

    DRT-01011-C2

    200 T

    1000 T

    2× Direct qPCR Mix-SYBR

    1 ml × 2

    1,7 ml × 6

    50× ROX atsauces krāsa

    40 μl

    200 μl

    RNāzes nesaturošs ddH2O

    1,7 ml

    10 ml

    Lietošanas rokasgrāmatas:

    QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR komplekts-SYBR Green I

    Uzrakstiet savu ziņu šeit un nosūtiet to mums