(96 iedobēm) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR komplekts — Taqman
Apraksti
The(96 iedobes) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR komplekts–Taqmannodrošinaunikāla līzes bufera sistēmato ātri atbrīvo RNSno kultivētas šūnasparaugus RT-qPCR reakcijām, novēršot laikietilpīgo un darbietilpīgoRNS attīrīšanas process, un nepieciešamas tikai 7 minūtes, lai iegūtu nepieciešamo RNS veidni.The5 × tiešā RT sajaukšanaun2× Direct qPCR Mix-SYBRkastītē sniegtā var ātri unefektīvi iegūt reāllaika kvantitatīvoPCR rezultāti.
5× Direct RT Mix un 2× Direct qPCR Mix-Taqman ir spēcīga inhibitoru tolerance, un tie var izmantot pārbaudāmā parauga lizātu kā veidni efektīvai reversajai transkripcijai un specifiskai pastiprināšanai.Reaģents satur Foregene unikālo reverso transkriptāzi ar augstu afinitāti pret RNS, kā arī Hot D-Taq DNS polimerāzi, dNTP, MgCl.2 , reakcijas buferis, PCR optimizētājs un stabilizators, un to var izmantot kopā ar līzes buferi, lai ātri, viegli un precīzi noteiktu paraugu, un tam piemīt augsta jutība, spēcīga specifika un laba stabilitāte.
Komplekts ir paredzēts 96 iedobēs kultivētu šūnu mikrosistēmu līzei, un tam ir laba viendabīgums un konsistence;komplekta komponenti nodrošina 96 līzes reakcijas, 96 reversās transkripcijas reakcijas un 96 × 2 qPCR reakcijas, kas var atbilst 96 iedobju šūnu plāksnei vienreizējai lietošanai, izvairoties no piesārņojuma, ko izraisa atkārtota reaģentu atvēršana, sasaldēšana un atkausēšana, kā arī reaģenta veiktspējas pasliktināšanās.
Komplekta sastāvdaļas
| Komplekta sastāvs ( 50 μL līzes sistēma/20 μLRT reakcijas sistēma /20μL qPCR reakcijas sistēma) | DRT-03021 | Piezīme | |
| 96T | |||
| daļaI | BuferisCL | 5 ml | ŠūnaLīze |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BuferisST | 500 μL | ||
| daļa II | DNSDzēšgumija | 100 μL | |
| 5 × tiešā RT sajaukšana | 400 μL | RT | |
| 2 × tiešais qPCR maisījums-Takmans | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX atsauces krāsa | 400µL | ||
| RNāze- BezmaksasddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mgada | 1 gabals | 1 porcija | |
*: Lizes reaģents DNS Eraser ir iekļauts komplekta II daļā;Šūnu līzes, RT un qPCR komponentus var iegādāties atsevišķi.
Īpašības un priekšrocības
■Vienkārši un efektīvi: ar Cell Direct RT tehnoloģiju RNS paraugus var iegūt tikai 7 minūtēs.
■ Izlases pieprasījums ir mazs, var pārbaudīt pat 10 šūnas.
■ Liela caurlaidspēja: tā var ātri noteikt RNS šūnās, kas kultivētas 384, 96, 24, 12, 6 bedrīšu plāksnēs.
■ DNS Eraser var ātri noņemt atbrīvotos genomus, ievērojami samazinot ietekmi uz turpmākajiem eksperimenta rezultātiem.
■ Optimizētā RT un qPCR sistēma padara divpakāpju RT-PCR reverso transkripciju efektīvāku un PCR specifiskāku un izturīgāku pret RT-qPCR reakcijas inhibitoriem.
Komplekta pielietojums
Pielietojuma joma: kultivētas šūnas.
- RNS, kas izdalās parauga līzes rezultātā: attiecas tikai uz šī komplekta RT-qPCR veidni.
- Komplektu var izmantot šādiem mērķiem: gēnu ekspresijas analīzei, siRNS mediētā gēnu klusēšanas efekta pārbaudei, zāļu skrīningam utt.
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Šī komplekta I daļa jāuzglabā 4℃;II daļa jāuzglabā -20 ℃.
Foregene Protease Plus II jāuzglabā 4℃, nesasaldēt pie -20 ℃.
2. reaģents×Direct qPCR Mix-Taqman jāuzglabā -20 temperatūrā℃tumsā;ja to lieto bieži, to var uzglabāt arī 4℃ īslaicīgai uzglabāšanai (izlietot 10 dienu laikā).
Reālā laika PCR primer dizaina principi
Forward Primer un Reverse Primer
Reāllaika PCR gadījumā primer dizains ir ļoti svarīgs.Praimeri ir saistīti ar PCR amplifikācijas specifiku un efektivitāti, un tos var veidot, pamatojoties uz šādiem principiem:
- Primer garums: 18-30bp.
- GC saturs: 40-60%.
- Tm vērtība: Primer projektēšanas programmatūra, piemēram, Primer 5, var norādīt gruntskrāsas Tm vērtību.Augšējā un lejtecē esošo primeru Tm vērtībām jābūt pēc iespējas tuvākām.Var izmantot arī Tm aprēķina formulu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Veicot PCR, par atkausēšanas temperatūru parasti tiek izvēlēta temperatūra, kas ir zemāka par primera Tm vērtību 5 °C (atbilstošs atkausēšanas temperatūras paaugstinājums var palielināt PCR reakcijas specifiku).
- Primeri un PCR produkti:
- Dizaina primer PCR amplifikācijas produkta garums ir vēlams 100-150 bp.
- Pēc iespējas jāizvairās no dizaina gruntēšanas veidnes sekundārajā strukturālajā zonā.
- Izvairieties no 2 vai vairāk komplementāru bāzu veidošanās starp augšpus un lejpus esošajiem gruntskrāsām 3′ galiem.
- Primer 3′ spailes pamatne nevar būt ar 3 papildu secīgiem G vai C.
- Pašiem praimeriem nevar būt komplementāras struktūras, pretējā gadījumā veidosies matadata struktūra, kas ietekmēs PCR amplifikāciju.
- ATCG ir jāsadala pēc iespējas vienmērīgāk primeru secībā, un jāizvairās no 3′ gala bāzes kā T.
Pielikums1:Cell TiešaisRT-qPCR Komplekta sastāvdaļat papildinājumu iepakojums
1. Šūnu līzes šķīdums
| Šūnu līzes šķīdums | |||
| Komplekta sastāvdaļas (24 bedrīšu līzes sistēma / iedobe) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| daļaes | Buferis CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buferis ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| daļaII | DNS dzēšgumija | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT maisījums | |
| Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × tiešā RT sajaukšana | 800 μl |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR maisījums | ||
| Komplekta sastāvdaļas (20 μl reakcijas sistēma) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX atsauces krāsa | 40 μl | 200 μl |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Lietošanas rokasgrāmatas:
