Zemo A260/A230 attiecību parasti izraisa piemaisījumi ar maksimālo absorbcijas viļņa garumu pie 230 nm.Apskatīsim, kas ir šajos piemaisījumos:

• Parastie piesārņotāji	Absorbcijas viļņa garums	Attiecību efekts
  Olbaltumvielas	~230nm un 280nm	Vienlaicīga A samazināšana260/A 280un A260/A 280attiecības
  Guanidīna sāls	220-240 nm	Samaziniet A260/A 280attiecība
  Fenols	~270nm	-
  Trizols	~230nm un 270nm	Samaziniet A260/A 280attiecība
  EDTA	~230nm	Samaziniet A260/A 280attiecība
  Etanols	230-240 nm	Samaziniet A260/A 280attiecība

 
 
 
Parasto piesārņotāju absorbcijas viļņa garums un kontrasta vērtība

Proteīna piesārņojums
Olbaltumvielu piesārņojumu var uzskatīt par visizplatītāko piesārņojumu nukleīnskābju ekstrakcijas procesā.Proteīns atrodas starp augšējo un apakšējo ūdens fāziorganisksfāze .Piesārņojums vienlaikus samazinās attiecību A260/A280 un A260/A230, un attiecība A260/A230 mainīsies daudz acīmredzamāk nekā attiecība A260/A280.
Turpmākajosapgrieztā transkripcijaor qPCR reakcijas, olbaltumvielu atliekas var kavēt vai traucēt fermentu darbību.Labākais veids, kā izvairīties no proteīnu piesārņojuma, ir paturēt prātā principu “drīzāk mazāk nekā vairāk, mazs daudzums daudzas reizes”, aspirējot supernatantu.

2. Guanidīna piesārņojums
hidrohlorīds (GuHCl) un guanidīna tiocianāts (GTC) denaturē olbaltumvielas, kas nukleīnskābju ekstrakcijas procesā var ātri iznīcināt šūnu membrānas, izraisot olbaltumvielu denaturāciju un izgulsnēšanos.GuHCl un GTC absorbcijas viļņa garums ir no 220 līdz 240 nm, unAtlikušais guanidīnija sāls samazinās A260/A230 attiecību.Lai gan atlikušais guanidīnija sāls samazina attiecību,ietekme uz pakārtotajiem eksperimentiem faktiski ir niecīga.

3. Trizola piesārņojums
Galvenā Trizol sastāvdaļa ir fenols.Fenola galvenā funkcija ir lizēt šūnas un atbrīvot šūnās olbaltumvielas un nukleīnskābju vielas.Lai gan fenols var efektīvi denaturēt proteīnus, tas nevar pilnībā inhibēt RNāzes aktivitāti.Tāpēc TRIzolam pievieno 8-hidroksihinolīnu, guanidīna izotiocianātu, β-merkaptoetanolu utt., lai inhibētu endogēno un eksogēno RNāzi.
Ekstrahējot šūnu RNS, Trizol var ātri lizēt šūnas un inhibēt no šūnām atbrīvoto nukleāzi, un atlikušais Trizol ievērojami samazinās A260/A230 attiecību.
Apstrādes metode: centrifugējot, jāņem vērā, ka fenols Trizol sastāvā 4° un istabas temperatūrā viegli šķīst ūdens fāzē.

4. Etanola atlikums
Etanolu izmanto pēdējā procesā, lai izgulsnētu DNS, vienlaikus izšķīdinot sāls jonus, kas var būt saistīti ar DNS.Augstākā absorbcijas viļņa garumsuzsūkšanās maksimumsetanols ir arī pie 230-240 nm, kassamazinās arī A260/A230 attiecību.
Metode, kā izvairīties no etanola atliekām, var atkārtot divas reizes pēdējās eluēšanas laikā, iepūšotdūmu pārsegsdivas minūtes, lai ļautu etanolam pilnībā iztvaikot, pirms pievieno buferšķīdumu eluēšanai.
Tomēr jāzina, ka attiecība ir tikai RNS kvalitātes novērtēšanas indekss.Ja iepriekš minētās darbības tiek stingri reglamentētas, novirze starp attiecību un standarta diapazonu neatstās lielu ietekmi uz pakārtotajiem eksperimentiem.
Saistītie produkti:
Dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts
Augu kopējās RNS izolācijas komplekts
Šūnu kopējās RNS izolācijas komplekts
Augu kopējā RNS izolācijas komplekts Plus