Tiešais RT-qPCR komplekts III
Komplekta apraksts:
◮Tiešais RT-qPCR komplekts, izmantojot Foreasy Reverse Transcriptase un Foreasy HS Taq DNS polimerāzi, ko izstrādā Foregene, ar unikālu reakcijas buferi, padara šo komplektu ar spēcīgu pretestību un savietojamību, un tas var tieši pārbaudīt reakciju, izmantojot Foregene Lysis sistēmu kā veidni.Šo komplektu var izmantot COVID-19 nukleīnskābju noteikšanas komplekta un citu patogēno baktēriju nukleīnskābju noteikšanas komplekta izstrādei.
Apraksts
Tiešais RT-qPCR komplekts nodrošina atsevišķi iepakotu RT-qPCR buferi (ar sajauktu Foreasy HS Taq DNS polimerāzi) un augstu efektivitāti.Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),padarot to ērtu aizmugures komplektu izveidošanai un sistēmas regulēšanai, veicot vienkāršu pārbaudi.
Tiešais RT-qPCR komplekts, izmantojot Foreasy Reverse Transcriptase un Foreasy HS Taq DNS polimerāzi, ko izstrādā Foregene, ar unikālu reakcijas buferi, padara šo komplektu ar spēcīgu pretestību un savietojamību, un tas var tieši pārbaudīt reakciju, izmantojot Foregene Lysis sistēmu kā veidni.Šo komplektu var izmantot COVID-19 nukleīnskābju noteikšanas komplekta un citu patogēno baktēriju nukleīnskābju noteikšanas komplekta izstrādei.
Šis komplekts var būt tieši IVD produkta sastāvdaļa, un to var viegli un ātri lietot.Tam nepieciešama tikai vienkārša pārbaude, atkārtoti neattīstot.
Specifikācijas
500T, 50 000T
Komplekta sastāvdaļas
| Komplekta saturs (20 μL reakcijas sistēma) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50 000 t | |
| Foreasijs Reverse transkriptāze(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| 2 × tiešā qPCRMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instrukcija | 1 | 1 |
Darbības soļi
A: Sagatavojiet veidni un reaģentu
1. Sagatavojiet sagatavotu RNS veidni (RNS šablona ekstrakcijai un attīrīšanai ieteicams izmantot Foregene Total RNA Isolation Kit sērijas komplektu) vai parauga krekinga produktu (Ieteicams izmantot Foregene Lysis sistēmu), specifiskus praimerus (10 μM) un citus atbilstošus palīgmateriālus, instrumentu.
2. Ievietojiet 2× Direct RT-qPCR buferi, RNase-Free ddH2O un 20× ROX Reference Dye (ja tas ir nepieciešams) kastē ar ledu, liekot tām izkust dabiski un viegli samaisīt.
B: RT-qPCR sistēmas sagatavošana
Iegūstiet pusi no reakcijas sistēmas reakcijas bufera tilpuma (piemēram, ja sistēmas tilpums ir 20 μL, tai jāiegūst 10 μL 2× Direct RT-qPCR buferis). Priekšatbilstošs fermenta daudzums, mēs to iesakāmM-MLV: 10-30 U/20 μL reakcijas sistēma,TaqDNS polimerāze：1-2 U/20 μL reakcijas sistēmaŠis ir mūsu ieteikums, jums tas jāpārbauda un jāpielāgo), pievienojiet RNS veidni, specifiskus primerus un zondes un pievienojiet RNase-free ddH2O līdz 20 μL.Konkrēto RT-qPCR reakcijas sistēmas sagatavošanu var skatīt šajā 1. tabulā.
1. tabula. RT-qPCR sistēmas sagatavošana
| Komponents | Skaļums | Galīgā koncentrācija |
| 2× Direct RT-qPCR buferis | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNS polimerāze | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Reversais gruntējums (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Zonde (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Veidne (RNS vai lizāts) | X μL | |
| 20× ROX atsauces krāsa | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Kopējais apjoms | 20 μL |
Piezīme: Forward Primer un Reverse Primer ir specifiski mērķa gēna primeri.qPCR sistēmu var pielāgot atbilstoši praktiskiem eksperimentāliem un PCR modeļiem.Lielākajai daļai primeru galīgajai koncentrācijai mēs iesakām 400 nM.Lūdzu, noregulējiet konkrētu praimeru un zondu tilpumu atbilstoši sagatavotajai koncentrācijai un ieteicamajai galīgajai koncentrācijai.
1*: izvēlieties piemērotu ROX Reference Dye galīgo koncentrāciju atbilstoši dažādiem kvantitatīviem PCR instrumentiem.Parasto kvantitatīvo PCR instrumentu optimālā ROX Reference Dye koncentrācija ir parādīta tabulā:
| Kvantitatīvie PCR instrumenti | ROX atsauces krāsas galīgā koncentrācija |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,utt. | 1 × (piemēram, pievienojiet 1 μl 20 × ROX atsauces krāsvielu 20 μL reakcijas sistēmā) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P un Mx4000 utt. | 0,5 × (piemēram, pievienojiet 0,5 μl 20 × ROX Reference Dye 20 μL reakcijas sistēmā) |
| Roche PCR instruments, Bio-Rad PCR instruments, Eppendorf kvantitatīvais PCR instruments utt. | Bez ROX atsauces krāsas |
Uzglabāšana un glabāšanas laiks
Komplekts jāuzglabā -20 ± 5℃ temperatūrā.Tas nekavējoties jāuzglabā -20 ℃ termostata ledusskapī.Derīguma termiņš ir 2 gadi, ja tas tiek uzglabāts piemērotā stāvoklī.
