Rokasgrāmatas problēmu analīzei

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

RNS nevar ekstrahēt vai nukleīnskābes iznākums ir zems

Parasti ir daudzi faktori, kas ietekmē reģenerācijas efektivitāti, piemēram: parauga RNS saturs, darbības metode, eluēšanas tilpums utt.

Bieži sastopamo cēloņu analīze:

1. Ledus vanna vai zemas temperatūras (4 °C) centrifugēšana darbības laikā.

Ieteikums: Darbība istabas temperatūrā (15-25 °C), nekad ledus vannā un zemas temperatūras centrifūgā.

2. Nepareiza paraugu uzglabāšana vai pārāk ilga paraugu uzglabāšana.

Ieteikums: Uzglabājiet paraugus -80 ° C temperatūrā vai sasaldējiet šķidrā slāpeklī un izvairieties no atkārtotas sasaldēšanas-atkausēšanas;mēģiniet RNS ekstrakcijai izmantot tikko savāktos paraugus.

3.Nepietiekama parauga līze

Ieteikums: lūdzu, pārliecinieties, ka paraugs un darba šķīdums (Lineārais akrilamīds) ir rūpīgi sajaukti un inkubēti 10 minūtes istabas temperatūrā (15-25 °C).

4.Eluents tika pievienots nepareizi

Ieteikums: pārliecinieties, ka attīrīšanas kolonnas membrānas vidū ir pievienots RNase-Free ddH2O.

5. Nepareizs bezūdens etanola daudzums buferšķīdumā viRW2

Ieteikums: lūdzu, izpildiet norādījumus, pievienojiet pareizo daudzumu bezūdens etanola buferšķīdumam viRW2 un kārtīgi samaisiet pirms komplekta lietošanas.

6. Nepareiza parauga izmantošana.

Ieteikums: 200 µl parauga uz 500 µl bufera viRL.Pārmērīga parauga tilpuma dēļ samazināsies RNS ekstrakcijas ātrums.

7.Nepareizs eluēšanas tilpums vai nepilnīga eluēšana.

Ieteikums: Attīrīšanas kolonnas eluenta tilpums ir 30-50μl;ja eluēšanas efekts nav apmierinošs, ieteicams pievienot iepriekš uzkarsētu RNase-Free ddH₂O un pagariniet laiku, novietojot istabas temperatūrā, piemēram, 5-10 min

8. Attīrīšanas kolonnā ir etanola atlikumi pēc skalošanas buferšķīdumā viRW2.

Ieteikums: Ja pēc skalošanas buferšķīdumā viRW2 un tukšas mēģenes centrifugēšanas 2 minūtes joprojām paliek etanols, attīrīšanas kolonnu pēc centrifugēšanas tukšā mēģenē var atstāt istabas temperatūrā 5 minūtes, lai pilnībā noņemtu atlikušo etanolu.

Attīrītu RNS molekulu degradācija

Attīrītās RNS kvalitāte ir saistīta ar tādiem faktoriem kā paraugu uzglabāšana, RNāzes piesārņojums un darbība.

Bieži sastopamo cēloņu analīze:

1.Ievāktie paraugi netika savlaicīgi saglabāti.

Ieteikums: Ja paraugs netiek izmantots laikā pēc savākšanas, lūdzu, nekavējoties uzglabājiet to -80 ℃ vai šķidrā slāpeklī.RNS molekulu ekstrakcijai, kad vien iespējams, mēģiniet izmantot tikko savāktus paraugus.

2. Savāktie paraugi tika atkārtoti sasaldēti un atkausēti.

Ieteikums: Izvairieties no atkārtotas sasaldēšanas un atkausēšanas (ne vairāk kā vienu reizi) paraugu savākšanas un uzglabāšanas laikā, pretējā gadījumā samazināsies nukleīnskābes iznākums.

3. Operāciju zālē tika ieviesta RNāze vai netika valkāti vienreizējie cimdi, maskas utt.

Ieteikums: RNS molekulu ekstrakcijas eksperimentu vislabāk veikt atsevišķā RNS operāciju telpā, un eksperimentālo galdu pirms eksperimenta notīra.Eksperimenta laikā valkājiet vienreizējās lietošanas cimdus un maskas, lai izvairītos no RNS degradācijas, ko izraisa RNāzes ievadīšana.

4. Lietošanas laikā reaģents ir piesārņots ar RNāzi.

Ieteikums: nomainiet ar jaunu vīrusu RNS izolācijas komplektu saistītiem eksperimentiem.

5. RNāzes piesārņojums centrifūgas caurulēs, pipešu uzgaļos utt. Ieteikums: Pārliecinieties, vai centrifūgas mēģenes, pipetes uzgaļi un pipetes nesatur RNāzes.

Attīrītās RNS molekulas ietekmēja pakārtotos eksperimentus

RNS molekulas, kas attīrītas ar attīrīšanas kolonnu, ietekmēs pakārtotos eksperimentus, ja ir pārāk daudz sāls jonu vai proteīnu, piemēram: reversā transkripcija, Northern Blot utt.

1.Eluētajās RNS molekulās ir atlikušie sāls joni.

Ieteikums: Pārliecinieties, vai buferšķīdumam viRW2 ir pievienots pareizais bezūdens etanola daudzums, un divreiz mazgājiet attīrīšanas kolonnu atbilstoši pareizajam centrifugēšanas ātrumam, kas norādīts lietošanas instrukcijā. Ja vēl ir atlikuši sāls joni, varat pievienot attīrīšanas kolonnai Buffer viRW2 un atstāt to istabas temperatūrā 5 minūtes.Pēc tam veiciet centrifugēšanu, lai maksimāli noņemtu sāls jonu piesārņojumu

2. Eluētajās RNS molekulās ir atlikušais etanols

Ieteikums: kad esat pārliecināts, ka attīrīšanas kolonnas ir izskalotas ar buferšķīdumu viRW2, veiciet centrifugēšanu tukšā caurulē atbilstoši centrbēdzes ātrumam, kas norādīts lietošanas instrukcijā.Ja vēl ir palicis etanols, pēc centrifugēšanas tukšā mēģenē to var atstāt uz 5 minūtēm istabas temperatūrā, lai maksimāli noņemtu atlikušo etanolu.

Lietošanas rokasgrāmatas:

Vīrusu RNS izolācijas komplekta lietošanas instrukcija